DE3815645A1 - A process for the production of a pure platelet concentrate from whole blood - Google Patents
A process for the production of a pure platelet concentrate from whole bloodInfo
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Abstract
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines reinen Thrombozytenkonzentrates aus stabilisiertem Gesamt blut.The invention relates to a method for producing a pure platelet concentrate from stabilized total blood.
Bei der üblichen Thrombozyten-Gewinnung wird zunächst das Gesamtblut so zentrifugiert, daß eine obere thrombozyten reiche Plasmaschicht gebildet wird. Diese Schicht wird an schließend in einen zweiten Beutel übertragen und dieser wiederum bei hoher g-Zahl (2000-5000 g) zentrifugiert. Da bei werden eine obere Schicht aus thrombozytenarmem Plasma und eine untere Schicht, die Thrombozyten, erhalten. Nach Abtrennen des plättchenarmen Plasmas wird die Thrombozyten schicht in ca. 50 ml zurückbleibendem Plasma resuspendiert und bildet das Thrombozytenkonzentrat.In the usual platelet collection, this is first Whole blood centrifuged so that an upper platelet rich plasma layer is formed. This layer is on then transferred to a second bag and this centrifuged again at a high g number (2000-5000 g). There at become an upper layer of platelet-poor plasma and a lower layer, platelets. To Removing the platelet-poor plasma becomes the platelet layer resuspended in approximately 50 ml of remaining plasma and forms the platelet concentrate.
Aufgrund der hier verwendeten Beutel sind reine Konzentrate häufig nicht zu erhalten, da unter anderem im oberen Beutel teil befindliche Abbrechteile bzw. Auslaß-Stutzen zu einem Festhalten von unerwünschten Zellen und dadurch bei Überlei tung des plättchenreichen Plasmas zur Kontamination des Konzentrates führen können.Because of the bags used here, they are pure concentrates often not available, among other things in the upper pouch partly located break-off parts or outlet nozzle to one Capture of unwanted cells and therefore in case of overlap treatment of the platelet-rich plasma to contaminate the Can concentrate.
Thrombozytenkonzentrate mit hoher Reinheit können, wie von Pieters et al. (Vox Sang. 49, 01-05, 1985) beschrieben, aus Blutkonserven gewonnen werden. Hierzu wird das in einem durchsichtigen Beutel, z. B. mit einer oberen sowie einer unteren Auslaßleitung, wie in der DE-OS 30 12 227 oder in der EP-A 86 111 079 beschrieben, befindliche Gesamtblut zunächst mit hoher g-Zahl zentrifugiert. Dabei bilden sich eine obere Plasmaschicht, eine mittlere Buffy-Coat-Schicht, welche Leukozyten und Thrombozyten enthält, sowie eine untere Erythrozytenschicht aus.Platelet concentrates with high purity can, as of Pieters et al. (Vox Sang. 49, 01-05, 1985) Blood can be obtained. This is done in one clear bag, e.g. B. with an upper and a lower outlet line, as in DE-OS 30 12 227 or in the whole blood described in EP-A 86 111 079 centrifuged with a high g-number. Thereby form an upper plasma layer, a middle buffy coat layer, which contains leukocytes and platelets, and one lower erythrocyte layer.
Mittels geeigneter Vorrichtungen, wie z. B. in der DE-OS 34 17 892 beschrieben, werden das plättchenarme Plasma und die Buffy-Coat-Schicht jeweils in separate Beutel abge preßt.By means of suitable devices, such as. B. in DE-OS 34 17 892 described, the platelet-poor plasma and the buffy coat layer in separate bags presses.
Anschließend wird das Buffy-Coat mit etwa ¹/₃ des Volumens mit Plasma versetzt und bei niedriger g-Zahl (bis 1000 g) zentrifugiert. Hierbei wird der Beutel in einer speziellen Vorrichtung im Zentrifugenbecher gehalten. Danach wird die obere Schicht, das Thrombozytenkonzentrat, abgetrennt.Then the buffy coat with about ½ of the volume mixed with plasma and with a low g number (up to 1000 g) centrifuged. Here, the bag is in a special Device held in the centrifuge cup. After that the upper layer, the platelet concentrate, separated.
Bei dieser Methode sind Verluste jedoch nicht zu vermeiden, da hier die viskose Buffy-Coat-Schicht, die die Thrombozy ten enthält und sehr leicht an den Beutelwänden hängen bleibt, zunächst in einen anderen Beutel ausgetragen wird.However, losses cannot be avoided with this method, because here the viscous buffy coat layer, which the thrombozy contains ten and hang very easily on the bag walls remains, is first discharged into another bag.
Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, ein Verfah ren zur Bereitstellung eines Thrombozytenkonzentrates zu entwickeln, welches verlustfrei aus Gesamtblut erhalten werden kann und einen hohen Reinheitsgrad aufweist. The invention is therefore based on the object of a method to provide a platelet concentrate develop, which is losslessly obtained from whole blood can be and has a high degree of purity.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß durch das in Anspruch 1 der vorliegenden Erfindung beschriebene Verfahren gelöst.This object is achieved according to the invention in claim 1 Method described in the present invention solved.
Erfindungsgemäß wird hierbei die Übertragung der Buffy-Coat-Schicht vom ursprünglichen Beutel in einen Über tragungsbeutel und dadurch Verluste an Thrombozytenkonzen trat vermieden.According to the invention, the transmission of the Buffy coat layer from the original pouch to an over carrying bag and thereby loss of platelet concentration stepped avoided.
Weiterhin wird durch das Fixieren des Beutels während der zweiten Zentrifugation - entweder durch direktes Einhängen oder durch Befestigung entlang der Linie A-B, die die Abtrennung des oberen Beutelteils begrenzt - eine Kontamina tion des oberen Beutelteils und somit des Plasmas mit Blut zellen unterbunden, da der an sich flexible Beutel durch die Fixierung definiert in der Zentrifuge gehalten wird.Furthermore, by fixing the bag during the second centrifugation - either by hanging directly or by fastening along the line AB , which limits the separation of the upper part of the bag - contamination of the upper part of the bag and thus of the plasma with blood cells is prevented, since the flexible bag defined by the fixation is held in the centrifuge.
Der die verschiedenen Blutkomponenten enthaltende, mit einer oberen und einer unteren Auslaßleitung versehene Beutel wird mittels einer automatisch betriebenen und ent sprechend gesteuerten Vorrichtung ausgepreßt. Dabei können das Blutplasma und die roten Blutzellen gleichzeitig durch die obere bzw. untere Auslaßleitung ausgetragen werden. Der Beutel wird im wesentlichen durch gleichförmiges Zu sammendrücken, z. B. zwischen zwei im Ausgangszustand im Winkel angeordneten Platten,zusammengepreßt. Mittels geeig neter Detektoren, welche an einem Auslaßschlauch oder im Beutelbereich angeordnet sein können, kann das Abpreßen bis zu einem vorgewählten Niveau erfolgen. Mit Detektoren im Beutelbereich wird beispielsweise die Buffy-Coat-Schicht auf gleichem Niveau gehalten. Der obere Auslaß wird automa tisch gesperrt bzw. geöffnet, wenn die dünne Zwischen schicht des zentrifugierten Gesamtbluts entweder oberhalb oder unterhalb der festgelegten Grenze liegt. Dieser Vor gang wird beendet, sobald ein vorgewähltes Endvolumen er reicht ist. Mit einem Detektor im Bereich der oberen Aus laßleitung wird die obere Auslaßleitung gesteuert, sobald die Blutzellenschicht diesen Detektor erreicht. Die Erythro zytenschicht wird solange noch weiter abgepreßt, bis das vorgewählte Endvolumen erreicht worden ist.The one containing the various blood components, with an upper and a lower outlet pipe Bag is automatically operated and ent pressed controlled device. You can the blood plasma and the red blood cells through at the same time the upper and lower outlet lines are discharged. The bag is essentially closed by uniform press together, e.g. B. between two in the initial state in Plates arranged at an angle, pressed together. Appropriate neter detectors, which are connected to an outlet hose or Bag area can be arranged, the pressing up to a preselected level. With detectors in the bag area there is, for example, the buffy coat layer kept at the same level. The upper outlet is automa locked or opened table when the thin intermediate layer of the centrifuged whole blood either above or is below the specified limit. This before course ends as soon as a preselected final volume is enough. With a detector in the area of the upper Aus inlet line, the upper outlet line is controlled as soon as the blood cell layer reaches this detector. The erythro cytic layer is pressed down further until the preselected final volume has been reached.
Im erfindungsgemäßen Verfahren werden daher Blutbeutel verwendet, welche mindestens einen oberen Auslaß und einen unteren Auslaß aufweisen und zusätzlich so konstruiert sind, daß sie während der Zentrifugation nicht beschädigt werden können und eine Verwirbelung der auszutragenden Komponenten vermieden wird.Blood bags are therefore used in the method according to the invention used, which has at least one upper outlet and one have lower outlet and additionally constructed so are that they are not damaged during centrifugation can be and a turbulence of the to be carried Components is avoided.
Das Verfahren und die erfindungsgemäßen Blutbeutel werden anhand der Abb. 1 und 2 näher erläutert.The method and the blood bags according to the invention are explained in more detail with reference to FIGS. 1 and 2.
Abb. 1 zeigt schematisch einen Blutbeutel, wie er im erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzt wird. Er weist nur am oberen Ende eine Auslaßleitung (5), die durch ein Mehr fachverbindungssystem, z. B. ein Abbrechteil (4), ver schlossen ist, auf. Ihr gegenüber ist am unteren Ende eine Auslaßleitung (6) angeordnet. Neben der unteren Auslaß leitung (6) befindet sich ein Füll- bzw. Blutentnahme schlauch (7). Fig. 1 shows schematically a blood bag as used in the method according to the invention. It only has an outlet line ( 5 ) at the upper end, which is connected by a multiple connection system, e.g. B. a break-off part ( 4 ), is closed on. Opposite it, an outlet line ( 6 ) is arranged at the lower end. In addition to the lower outlet line ( 6 ) there is a filling or blood sampling tube ( 7 ).
Mit dieser Beutelkonstruktion wird gewährleistet, daß das Abbrechelement (4) während des Zentrifugierens immer oben liegt und somit nicht zerbrechen kann. Da der untere Beutel teil kein solches Abbrechelement aufweist, wird hier eine Verwirbelung des Sediments bei der Handhabung vermieden. Darüberhinaus werden keine unerwünschten Blutzellen durch Anschluß-Stutzen festgehalten.This bag construction ensures that the break-off element ( 4 ) is always on top during centrifugation and therefore cannot break. Since the lower bag has no such break-off element, turbulence in the sediment during handling is avoided here. In addition, no unwanted blood cells are retained by connecting pieces.
Da die Zulaufleitung (7) im unteren Beutelteil angeordnet ist, wird eine Kontamination der oberen Plasmaschicht mit Blutzellen weiter reduziert.Since the inlet line ( 7 ) is arranged in the lower part of the bag, contamination of the upper plasma layer with blood cells is further reduced.
Somit werden die Plasma- und Erythrozytenschicht von der Buffy-Coat-Schicht abgetrennt, ohne daß unerwünschte Blut zellen zurückbleiben. Die nachfolgende Zentrifugation des Buffy-Coat in dem in der senkrechten Position fixierten Beutel (1), welcher nur zu einem Drittel gefüllt ist, führt Thrombozytenkonzentraten, welche über eine nicht kontami nierte Auslaßleitung bzw. Beutelkopf in reinem Zustand ausgetragen werden können.Thus, the plasma and erythrocyte layer are separated from the buffy coat layer without leaving unwanted blood cells. The subsequent centrifugation of the buffy coat in the bag ( 1 ) fixed in the vertical position, which is only filled to a third, leads to platelet concentrates which can be discharged in a pure state via an uncontaminated outlet line or bag head.
Das in der Abb. 2 dargestellte Blutbeutelsystem veran schaulicht das Verfahren zur Herstellung eines reinen Thrombozytenkonzentrats. Es enthält einen das Spenderblut aufnehmenden Beutel (1) mit Stabilisator und drei Über tragungsbeutel (2) und (2 a) sowie (3). Der Blutbeutel (1) mit dem Abbrechteil (4) ist über die obere Auslaßleitung (5) mit den Übertragungsbeuteln (2) und (2 a) über die untere Auslaßöffnung (6) mit dem Beutel (3) verbunden. Über den Füll- bzw. Blutentnahmeschlauch (7) wird in den Beutel (1) Blut stabilisiert und gespendet, die Fülleitung (7) abgesperrt und das Blut anschließend bei hoher g-Zahl zentrifugiert. Hierbei werden eine obere Plasmaschicht, eine mittlere Buffy-Coat-Schicht und eine untere Erythrozy tenschicht erhalten. Mittels einer automatisch gesteuerten Vorrichtung wird anschließend das plättchenarme Plasma über Leitung (5) in den Beutel (2) und die Erythrozyten schicht über Leitung (6) in den Beutel (3) übertragen. Das Erreichen der jeweiligen Grenzschicht kann mittels Schlauch- oder Beuteldetektoren ermittelt werden. Bei Er reichen eines vorgewählten Endvolumens wird der Abpreßvor gang beendet. Gegebenenfalls kann der das Erythrozytenkon zentrat aufnehmende Beutel (3) ein Konservierungsmittel enthalten. Das plättchenarme Plasma kann gegebenenfalls in zwei Fraktionen mit verschiedener Qualität aufgeteilt werden. Das zuerst abgepreßte Plasma, entsprechend ca. ²/₃ des Plasmavolumens, weist einen deutlich niedrigeren Zell gehalt auf als die zweite Fraktion.The blood bag system shown in Fig. 2 illustrates the process for producing a pure platelet concentrate. It contains a bag ( 1 ) containing the donor blood with stabilizer and three transfer bags ( 2 ) and ( 2 a ) and ( 3 ). The blood bag (1) with the break-off part (4), (a 2) via the lower outlet opening (6) to the bag (3) via the upper outlet pipe (5) with the transfer bags (2) and. Blood is stabilized and donated into the bag ( 1 ) via the filling or blood sampling tube ( 7 ), the filling line ( 7 ) is shut off and the blood is then centrifuged at a high g number. An upper plasma layer, a middle buffy coat layer and a lower erythrocyte layer are obtained. Using an automatically controlled device, the platelet-poor plasma is then transferred via line ( 5 ) into the bag ( 2 ) and the erythrocyte layer via line ( 6 ) into the bag ( 3 ). Reaching the respective boundary layer can be determined using hose or bag detectors. When He reach a preselected final volume, the Abpreßvor process is ended. If necessary, the bag ( 3 ) containing the erythrocyte concentrate can contain a preservative. The platelet-poor plasma can optionally be divided into two fractions of different quality. The first squeezed plasma, corresponding to approximately ² / ₃ of the plasma volume, has a significantly lower cell content than the second fraction.
Nachdem Plasma- und Erythrozytenschicht abgepreßt sind, werden die Auslaßleitungen (5) und (6) geschlossen und die Beutel (2) und (3) abgetrennt.After the plasma and erythrocyte layer have been pressed off, the outlet lines ( 5 ) and ( 6 ) are closed and the bags ( 2 ) and ( 3 ) are separated.
Der die Buffy-Coat-Schicht enthaltende Beutel (1) wird an schließend an den oberen Enden in einen Behälter einge hängt und erneut bei niedriger g-Zahl zentrifugiert. Vor zugsweise kann der nur zu einem Drittel gefüllte Beutel (1) auch im oberen Drittel abgeklemmt und entlang dieser Ab trennlinie A-B im Behälter aufgehängt werden.The bag ( 1 ) containing the buffy coat layer is then suspended at the upper ends in a container and centrifuged again at a low g number. Before preferably the only one-third filled bag ( 1 ) can also be clamped in the upper third and hung along this dividing line AB in the container.
Nach dem Zentrifugieren wird der Beutel (1) dem Zentrifugen behälter entnommen. Er enthält eine obere Schicht, das Thrombozytenkonzentrat, und eine untere Schicht mit Zellen des Buffy-Coats.After centrifugation, the bag ( 1 ) is removed from the centrifuge container. It contains an upper layer, the platelet concentrate, and a lower layer with cells from the Buffy coat.
Das Thrombozytenkonzentrat wird über die Auslaßleitung (5) in den Übertragungsbeutel (2 a) abgepreßt. Das hierbei erhaltene reine Thrombozytenkonzentrat kann in besonderen Beuteln bei 20-24°C über mehrere Tage stabil gelagert werden.The platelet concentrate is pressed through the outlet line ( 5 ) into the transfer bag ( 2 a ). The pure platelet concentrate obtained can be stored in special bags at 20-24 ° C for several days.
Der Vorteil des erfindungsgemäßen Verfahrens besteht zum einen darin, daß die aus Gesamtblut erhältliche Buffy-Coat-Schicht zur weiteren Auftrennung nicht in einen anderen Beutel übertragen werden muß. Dadurch werden Verluste an Konzentratkomponenten vermieden.The advantage of the method according to the invention is one in that the one available from whole blood Buffy coat layer not for further separation into one another bag must be transferred. This will Avoided loss of concentrate components.
Durch den Einsatz eines Sammelbeutels ohne zusätzlichen Anschlußstutzen mit nur einem Mehrfachbeutelverbindungs system, z. B. einem Abbrechteil, werden Aufwirbelungen der einzelnen Komponentenschichten vermieden. Durch Anordnung nur eines Schlauches im Beutelkopf wird eine Kontamination der hier durchgeleiteten Komponenten vermieden. Es werden somit reine Präparate erhalten. Nach dem erfindungsgemäßen Verfahren können Thrombozyten-Präparationen in hoher Rein heit auf einfache rationelle Weise verlustfrei aus Gesamt blut hergestellt werden.By using a collection bag without additional Connection piece with only one multiple bag connection system, e.g. B. a break-off part, whirling up individual component layers avoided. By order Only one tube in the bag head becomes contaminated of the components passed through here avoided. It will thus receive pure preparations. According to the invention Procedures can platelet preparations in high purity in a simple, rational, lossless manner from the total blood are made.
Claims (3)
- a) das in einem flexiblen Beutel mit einer oberen und einer unteren Auslaßleitung enthaltene Gesamtblut bei hoher g-Zahl zentrifugiert,
- b) die obere plättchenarme Plasmaschicht über die obere Leitung und die untere Erythrozytenschicht über die untere Leitung auspreßt,
- c) den noch die Buffy-Coat-Schicht und Restplasma enthal tenden ursprünglichen Beutel nach Durchmischung hängend bei niedriger g-Zahl zentrifugiert und
- d) das erhaltene Thrombozytenkonzentrat über die obere Auslaßleitung auspreßt und die im unteren Teil des Beutels befindlichen Zellen im Beutel läßt.
- a) centrifuging the whole blood contained in a flexible bag with an upper and a lower outlet line at a high g-number,
- b) the upper platelet-poor plasma layer is pressed out via the upper line and the lower erythrocyte layer via the lower line,
- c) the original bag still containing the buffy coat layer and residual plasma, after mixing, is centrifuged hanging at a low g number and
- d) the platelet concentrate obtained is pressed out via the upper outlet line and the cells in the lower part of the bag are left in the bag.
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