DE19957827C2 - Verwendung eines Oligomer-Arrays mit PNA- und/oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche - Google Patents

Verwendung eines Oligomer-Arrays mit PNA- und/oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche

Info

Publication number
DE19957827C2
DE19957827C2 DE19957827A DE19957827A DE19957827C2 DE 19957827 C2 DE19957827 C2 DE 19957827C2 DE 19957827 A DE19957827 A DE 19957827A DE 19957827 A DE19957827 A DE 19957827A DE 19957827 C2 DE19957827 C2 DE 19957827C2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
general formula
oligomers
dna
oligomer
use according
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
DE19957827A
Other languages
English (en)
Other versions
DE19957827A1 (de
Inventor
Kurt Berlin
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Epigenomics AG
Original Assignee
Epigenomics AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to DE19957827A priority Critical patent/DE19957827C2/de
Application filed by Epigenomics AG filed Critical Epigenomics AG
Priority to AT00993178T priority patent/ATE362548T1/de
Priority to PT00993178T priority patent/PT1232287E/pt
Priority to EP07090045A priority patent/EP1816216A3/de
Priority to US10/148,140 priority patent/US6936419B1/en
Priority to JP2001539907A priority patent/JP2003514570A/ja
Priority to NZ51854800A priority patent/NZ518548A/xx
Priority to PCT/DE2000/004301 priority patent/WO2001038565A2/de
Priority to SI200030961T priority patent/SI1232287T1/sl
Priority to MXPA02005221A priority patent/MXPA02005221A/es
Priority to AU28270/01A priority patent/AU784238B2/en
Priority to CN008161941A priority patent/CN1413263B/zh
Priority to DE50014333T priority patent/DE50014333D1/de
Priority to CA2390312A priority patent/CA2390312C/en
Priority to DK00993178T priority patent/DK1232287T3/da
Priority to ES00993178T priority patent/ES2287049T3/es
Priority to EP00993178A priority patent/EP1232287B1/de
Priority to IL14980100A priority patent/IL149801A0/xx
Publication of DE19957827A1 publication Critical patent/DE19957827A1/de
Priority to IS6364A priority patent/IS2445B/is
Publication of DE19957827C2 publication Critical patent/DE19957827C2/de
Application granted granted Critical
Priority to JP2006350139A priority patent/JP2007175051A/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
    • C12Q1/6837—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase using probe arrays or probe chips

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung eines Oligomer- Array mit PNA-(Peptide Nucleic Acids)- und/oder DNA- Oligomeren auf einer Oberfläche, zur Detektion von Cyto­ sin-Methylierungen in genomischer DNA.
Die nach den methodischen Entwicklungen der letzten Jahre in der Molekularbiologie gut studierten Beobachtungsebe­ nen sind die Gene selbst, die Übersetzung dieser Gene in RNA und die daraus entstehenden Proteine. Wann im Laufe der Entwicklung eines Individuums welches Gen angeschal­ tet wird und wie Aktivieren und Inhibieren bestimmter Ge­ ne in bestimmten Zellen und Geweben gesteuert wird, ist mit Ausmaß und Charakter der Methylierung der Gene bzw. des Genoms korrelierbar. Insofern ist die Annahme nahe­ liegend, daß pathogene Zustände sich in einem veränderten Methylierungsmuster einzelner Gene oder des Genoms äu­ ßern.
5-Methylcytosin ist die häufigste kovalent modifizierte Base in der DNA eukaryotischer Zellen. Sie spielt bei­ spielsweise eine Rolle in der Regulation der Transkripti­ on, genomischem Imprinting und in der Tumorgenese. Die Identifizierung von 5-Methylcytosin als Bestandteil gene­ tischer Information ist daher von erheblichem Interesse. 5-Methylcytosin-Positionen können jedoch nicht durch Se­ quenzierung identifiziert werden, da 5-Methylcytosin das gleiche Basenpaarungsverhalten aufweist wie Cytosin. Dar­ über hinaus geht bei einer PCR-Amplifikation die epigene­ tische Information, welche die 5-Methylcytosine tragen, vollständig verloren.
Die Modifikation der genomischen Base Cytosin zu 5'- Methylcytosin stellt den bis heute wichtigsten und best­ untersuchten epigenetischen Parameter dar. Trotzdem gibt es bis heute zwar Methoden, umfassende Genotypen von Zel­ len und Individuen zu ermitteln, aber noch keine ver­ gleichbaren Ansätze auch in großem Maße epigenotypische Information zu generieren und auszuwerten.
Eine relativ neue und die mittlerweile am häufigsten an­ gewandte Methode zur Untersuchung von DNA auf 5- Methylcytosin beruht auf der spezifischen Reaktion von Bisulphit mit Cytosin, das nach anschließender alkali­ scher Hydrolyse in Uracil umgewandelt wird, welches in seinem Basen-Paarungsverhalten dem Thymidin entspricht. 5-Methylcytosin wird dagegen unter diesen Bedingungen nicht modifiziert. Damit wird die ursprüngliche DNA so umgewandelt, daß Methylcytosin, welches ursprünglich durch sein Hybridisierungsverhalten vom Cytosin nicht un­ terschieden werden kann, jetzt durch "normale" molekular­ biologische Techniken als einzig verbliebenes Cytosin beispielsweise durch Amplifikation und Hybridisierung o­ der Sequenzierung nachgewiesen werden kann. Alle diese Techniken beruhen auf Basenpaarung, welche jetzt voll ausgenutzt werden kann. Der Stand der Technik, was die Empfindlichkeit betrifft, wird durch ein Verfahren defi­ niert, welches die zu untersuchende DNA in einer Agarose- Matrix einschließt, dadurch die Diffusion und Renaturie­ rung der DNA (Bisulphit reagiert nur an einzelsträngiger DNA) verhindert und alle Fällungs- und Reinigungsschritte durch schnelle Dialyse ersetzt (Olek, A. et al., Nucl. Acids. Res. 24, 5064-5066). Mit dieser Methode können einzelne Zellen untersucht werden, was das Potential der Methode veranschaulicht. Allerdings werden bisher nur einzelne Regionen bis etwa 3000 Basenpaare Länge unter­ sucht, eine globale Untersuchung von Zellen auf Tausende von möglichen Methylierungsereignissen ist nicht möglich.
Allerdings kann auch dieses Verfahren keine sehr kleinen Fragmente aus geringen Probenmengen zuverlässig analysie­ ren. Diese gehen trotz Diffusionsschutz durch die Matrix verloren.
Eine Übersicht über die weiteren bekannte Möglichkeiten, 5-Methylcytsosine nachzuweisen, kann auch dem folgenden Übersichtsartikel entnommen werden: Rein, T., DePamphi­ lis, M. L., Zorbas, H., Nucleic Acids Res. 26, 2255 (1998).
Es gibt grundsätzlich mehrere Möglichkeiten, Oligomer- Arrays auf den unterschiedlichsten Oberflächen herzustel­ len:
  • 1. Alle Oligomere werden auf herkömmliche Weise einzeln und in relativ großer Menge im Reagenzglas bzw. in den speziellen Syntheseautomaten hergestellt und danach ein­ zeln auf den Träger aufpipettiert. Dazu verwendet man üb­ licherweise automatische, hochpräzise Mikropipettierrobo­ ter. Der Vorteil dieses Verfahrens ist, daß es weitgehend auf bereits optimierten Standardmethoden und -Geräten be­ ruht. Dadurch kann man qualitativ hochstehende DNA-Arrays mit sehr reinen Oligomeren herstellen, was einen äußerst positiven Einfluß auf die mit dem Array erzielbare Detek­ tionsempfindlichkeit und -Zuverlässigkeit hat. Der große Nachteil des Verfahrens ist, daß es enorm aufwendig und deshalb teuer ist. Dies gilt in besonderem Masse für die Synthese der einzelnen Oligomere.
  • 2. Die Oligomere werden durch Pipettieren in kleinsten Mengen direkt auf dem Substrat synthetisiert. Auf jedem Rasterpunkt wird die dort vorgesehene Oligomerkette Nukleobase für Nukleobase aufgebaut. Zur Pipettierung verwendet man ähnlich wie bei Verfahren 1) einen spezia­ lisierten Mikropipettierroboter oder z. B. eine Vorrich­ tung, die Kanäle zur Zuführung der einzelnen Synthesebau­ steine zu den jeweiligen Punkten des Arrays enthält (EP-A 0915897). Das chemische Syntheseverfahren ist grundsätz­ lich das gleiche wie bei der herkömmlichen Oligomer- Synthese im Syntheseautomaten. Der Unterschied ist, daß alle Oligomere unabhängig von deren Anzahl gleichzeitig, von einer einzigen automatischen Anlage direkt am vorge­ sehenen Bestimmungsort hergestellt werden. Die bei Metho­ de 1) separaten Arbeitsschritte Oligomer-Synthese und Mikropipettierung sind nun zu einem einzigen Arbeits­ schritt zusammengefaßt. Der Aufwand an Geräten und an ma­ nueller Arbeit wird gegenüber Methode 1) erheblich redu­ ziert.
  • 3. Die Oligomere werden wie bei Methode 2) direkt auf dem Substrat synthetisiert, die gezielte Anbindung der richtigen Nukleobasen an den richtigen Rasterpunkten ge­ schieht jedoch durch eine vollkommen parallele, aus der Halbleiterfertigung stammende photolithographische Tech­ nik anstelle von sequentiellen, zielgenauen Pipet­ tierschritten. Das Verfahren basiert darauf, daß man mit Licht einer bestimmten Wellenlänge gezielt die 5'-OH Schutzgruppen von Oligonukleotiden entfernen kann. Durch geeignete örtliche Bestrahlungsmuster kann man somit Oli­ gonukleotid-Enden an genau jenen Rasterpunkten reaktions­ fähig machen, an die man im nächsten Schritt einen neuen Nukleotidbaustein anbinden will. Bei vollständiger Benet­ zung der Arrayoberfläche mit einer Nukleotidbaustein- Lösung wird somit nur an den vorher belichteten Stellen eine Nukleobase angebunden, alle unbelichteten Stellen bleiben unverändert. Die örtlichen Belichtungsmuster wer­ den erzeugt, indem man eine mikrophotographische schwarz­ weiß Maske zwischen dem Substrat und der Lichtquelle po­ sitioniert, die alle Rasterstellen abdeckt, die nicht re­ aktionsfähig gemacht werden sollen. Die Verlängerung der Oligomer-Ketten auf allen Rasterpunkten um eine Nukleoba­ se geschieht demnach wie folgt: Mit Hilfe einer ersten Maske werden genau jene Rasterpunkt belichtet, welche um die erste der 4 möglichen Sorten von Nukleobasen (z. B. C) erweitert werden müssen. Danach wird der Array mit einer Lösung des entsprechenden Nukleotidbausteins benetzt, worauf nur die belichteten Punkte um diese Base verlän­ gert werden. Da die neu angebundenen Nukleotidbausteine noch alle über eine Schutzgruppe verfügen, werden sie in den folgenden Schritten nicht weiter reagieren, bis ihre Schutzgruppen durch eine weitere Belichtung abgespaltet werden. Nach diesem Reaktionsschritt wird das Array gewa­ schen. Nun werden mit Hilfe einer zweiten Maske genau je­ ne Rasterstellen belichtet, welche um die zweite der 4 möglichen Nukleobasen (z. B. T) erweitert werden müssen. Darauf wird das Array wiederum mit einer Lösung des ent­ sprechenden Nukleotidbausteins benetzt und die belichte­ ten Stellen dadurch um diese Base verlängert. Genauso verfährt man für die verbleibenden zwei Nukleobasen (G und A). Für die Verlängerung aller Oligomere um eine Nukleobase benötigt man demzufolge vier Belichtungs­ schritte und somit 4 Photomasken.
Diese Methode ist wegen der hohen Parallelität in der Verarbeitung sehr schnell und effizient, zudem ist sie wegen der hohen Präzision, die mit Photolithographie er­ reicht werden kann, gut dazu geeignet, sehr hohe Raster­ dichten zu erzielen.
Eine Übersicht über den Stand der Technik in der Oligomer Array Herstellung läßt sich auch einer im Januar 1999 er­ schienen Sonderausgabe von Nature Genetics (Nature Gene­ tics Supplement, Volume 21, January 1999) und der dort zitierten Literatur entnehmen.
Patente, die sich allgemein auf die Verwendung von Oligo­ mer Arrays und photolithographisches Maskendesign bezie­ hen, sind z. B. US-A 5,837,832, US-A 5,856,174, WO-A 98/27430 und US-A 5,856,101. Zudem existieren einige Stoff- und Verfahrenspatente, welche die Verwendung pho­ tolabiler Schutzgruppen an Nukleosiden einschränken, so z. B. WO-A 98/39348 und US-A 5,763,599.
Um DNA zu immobilisieren, existieren verschiedene Verfah­ ren. Das bekannteste Verfahren ist die Festbindung einer DNA, welche mit Biotin funktionalisiert ist, an eine Streptavidin-beschichtete Oberfläche. Die Bindungsstärke dieses Systems entspricht einer kovalenten chemischen Bindung ohne eine zu sein. Um eine Ziel-DNA kovalent an eine chemisch vorbereitete Oberfläche binden zu können, bedarf es einer entsprechenden Funktionalität der Ziel- DNA. DNA selbst besitzt keine Funktionalisierung, die ge­ eignet ist. Es gibt verschiedene Varianten in eine Ziel- DNA eine geeignete Funktionalisierung einzuführen: Zwei leicht zu handhabende Funktionalisierungen sind primäre, aliphatische Amine und Thiole. Solche Amine werden quan­ titativ mit N-Hydroxy-succinimidestern umgesetzt und Thi­ ole reagieren unter geeigneten Bedingungen quantitativ mit Alkyliodiden. Eine Schwierigkeit besteht im Einführen einer solchen Funktionalisierung in eine DNA. Die ein­ fachste Variante ist die Einführung durch einen Primer einer PCR. Gezeigte Varianten benützen 5'-modifizierte Primer (NH2 und SH) und einen bifunktionalen Linker.
Ein wesentlicher Bestandteil der Immobilisierung auf ei­ ner Oberfläche ist ihre Beschaffenheit. Bis jetzt be­ schriebene Systeme sind hauptsächlich aus Silizium oder Metall (magnetic beads). Eine weitere Methode zur Bindung einer Ziel-DNA basiert darauf, eine kurze Erkennungsse­ quenz (z. B. 20 Basen) in der Ziel-DNA zur Hybridisierung an ein oberflächenimmobilisiertes Oligonukleotid zu ver­ wenden.
Als Sonden, die in einem Oligomer-Array auf einer Ober­ fläche fixiert werden, kommen Oligonukleotide in Frage, jedoch bietet sich auch jede Modifikation von Nukleinsäu­ ren an, z. B. Peptide Nucleic Acids (PNA), (Nielsen, P. E., Buchardt, O., Egholm, M. and Berg, R. H. 1993. Peptide nu­ cleic acids. US Patent. 5,539,082; Buchardt, O., Egholm, M., Berg, R. H. and Nielsen, P. E. 1993. Peptide nucleic acids and their potential applications in biotechnology. Trends in Biotechnology, 11: 384-386), Phosphorothioato­ ligonukleotide oder Methylphosphonatoligonukleotide. Die Spezifität einer Sonde ist sehr wesentlich. Peptide Nuc­ leic Acids haben ein ungeladenes Rückgrat, welches gleichzeitig chemisch sehr stark von der gängigen Zucker- Phosphat Struktur des Rückgrats in Nukleinsäuren ab­ weicht. Das Rückgrat einer PNA hat eine Amidsequenz an­ stelle des Zucker-Phosphat Rückgrats gewöhnlicher DNA. PNA hybridisiert sehr gut mit DNA komplementärer Sequenz. Die Schmelztemperatur eines PNA/DNA-Hybrids ist höher als die des entsprechenden DNA/DNA-Hybrids und die Abhängig­ keit der Hybridisierung von Puffersalzen ist relativ ge­ ring.
Matrix-assistierte Laser Desorptions/Ionisations Mas­ senspektrometrie (MALDI) ist eine neue, sehr leistungsfä­ hige Entwicklung für die Analyse von Biomolekülen (Karas, M. and Hillenkamp, F. 1988. Laser desorption ionization of proteins with molecular masses exceeding 10.000 daltons. Anal. Chem. 60: 2299-2301). Ein Analytmolekül wird in eine im UV absorbierende Matrix eingebettet. Durch einen kurzen Laserpuls wird die Matrix ins Vakuum verdampft und das Analyt so unfragmentiert in die Gaspha­ se befördert. Eine angelegte Spannung beschleunigt die Ionen in ein feldfreies Flugrohr. Auf Grund ihrer ver­ schiedenen Massen werden Ionen unterschiedlich stark be­ schleunigt. Kleinere Ionen erreichen den Detektor früher als größere und die Flugzeit wird in die Masse der Ionen umgerechnet.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, Oligomer- Arrays bereitzustellen, welche sich für die Detektion von Cytosin Methylierungen besonders eignen.
Die Aufgabe wird erfindungsgemäß durch die Verwendung ei­ nes Oligomer-Arrays mit PNA-(Peptide Nucleic Acids)- und/oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche, umfassend Oligomere aus jeweils zwischen 6 und 20 Monomeren oder Nukleobasen, wobei diese jeweils mindestens eine Sequenz der allgemeinen Formel DDCGDD oder der allgemeinen Formel DDTGDD oder der allgemeinen Formel HHCGHH oder der allge­ meinen Formel HHCAHH umfassen, wobei
H eine der Basen Adenin (A), Cytosin (C) oder Thymin (T) bedeutet und
D eine der Basen Adenin (A), Guanin (G) oder Thymin (T) darstellt,
und wobei der Ort der Oligomere auf der Oberfläche mit der Sequenz der Oligomere korreliert ist, zur Detektion von Cytosin-Methylierungen in genomischer DNA, gelöst.
Erfindungsgemäß besonders bevorzugt ist die Verwendung eines Oligomer-Arrays, dessen Oberfläche eben ist und bei welchem die Oligomere in einem rechtwinkligen oder hexa­ gonalen Raster, das die Zuordnung zu Koordinaten erlaubt, darauf angeordnet sind. Es können aber auch andere zweck­ mäßige geometrische Anordnungen gewählt werden, welche die Möglichkeiten der Automatisierung verbessern helfen wie beispielsweise circulare Anordnungen.
Weiterhin besonders bevorzugt ist die Verwendung eines Oligomer-Arrays, umfassend die Sequenzen der allgemeinen Formel DDCGDD und der allgemeinen Formel DDTGDD und der allgemeinen Formel HHCGHH und der allgemeinen Formel HHCAHH.
Ferner besonders bevorzugt ist die Verwendung eines Oli­ gomer-Arrays, umfassend die Sequenzen der allgemeinen Formel DDCGDD und der allgemeinen Formel DDTGDD oder Se­ quenzen der allgemeinen Formel HHCGHH und der allgemeinen Formel HHCAHH.
Erfindungsgemäß besonders bevorzugt ist außerdem die Ver­ wendung eines Oligomer-Arrays, welches mindestens 100 verschiedene Oligomere umfasst.
Besonders bevorzugt ist auch die Verwendung eines Oligo­ mer-Arrays, dessen Oberfläche auf Glas, aus Metall, einem anderen leitfähigem Material oder das Target eines MALDI- Massenspektrometers ist.
Die vorliegende Erfindung beschreibt somit Oligomer- Arrays, die zur Detektion des Methylierungszustandes ge­ nomischer DNA Proben verwendbar sind.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher die Verwendung eines erfindungsgemäßen Oligomer- Arrays zur Hybridisierung von DNA-Fragmenten nach vorhe­ riger Amplifikation.
Bevorzugt ist es dabei, dass man die DNA vor der Amplifi­ kation mit einer Bisulfitlösung (oder Hydrogensulfit-, Disulfitlösung) behandelt.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist also die Ver­ wendung einer Anordnung, vorzugsweise in Form eines Oli­ gomer-Arrays, von PNA (Peptide Nucleic Acids)- oder DNA- Oligomeren auf einer Oberfläche, umfassend Oligomere aus jeweils zwischen 6 und 20 Monomeren (oder Nukleobasen), die wiederum Sequenzen der allgemeinen Formel DDCGDD und/oder der allgemeinen Formel DDTGDD und/oder der all­ gemeinen Formel HHCGHH und/oder der allgemeinen Formel HHCAHH umfassen, wobei der Ort der Oligomere auf der O­ berfläche jeweils einen Rückschluß auf ihre Sequenz(en) erlaubt. Oligomer-Arrays dieses Typs sind besonders zur Detektion von Cytosin Methylierungen in genomischer DNA geeignet. Die oben aufgeführten Sequenzen hybridisieren je nach Methylierungsstatus der DNA nach deren chemischer Vorbehandlung mit Bisulfit unterschiedlich stark.
Um die von diesen Hybridisierungen ausgehenden Signale besser den eingesetzten Oligomersequenzen zuordnen zu können, ist es besonders bevorzugt, daß die Oberfläche eben ist und die Oligomere in einem rechtwinkligen oder hexagonalen Raster, das die Zuordnung zu Koordinaten er­ laubt, darauf angeordnet sind.
Bevorzugt ist eine Anordnung von PNA (Peptide Nucleic A­ cids)- oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche, umfas­ send Oligomere aus jeweils zwischen 6 und 20 Monomeren (oder Nukleobasen), umfassend Sequenzen der allgemeinen Formel DDCGDD und der allgemeinen Formel DDTGDD und der allgemeinen Formel HHCGHH und der allgemeinen Formel HHCAHH, wobei der Ort der Oligomere auf der Oberfläche jeweils einen Rückschluß auf ihre Sequenz(en) erlaubt.
Bevorzugt ist eine Anordnung von PNA (Peptide Nucleic A­ cids)- oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche, umfas­ send Oligomere aus jeweils zwischen 6 und 20 Monomeren (oder Nukleobasen) der allgemeinen Formel DDCGDD und der allgemeinen Formel DDTGDD, wobei der Ort der Oligomere auf der Oberfläche jeweils einen Rückschluß auf ihre Se­ quenz(en) erlaubt.
Bevorzugt ist eine Anordnung von PNA (Peptide Nucleic A­ cids)- oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche, umfas­ send Oligomere aus jeweils zwischen 6 und 20 Monomeren (oder Nukleobasen) der allgemeinen Formel HHCGHH und der allgemeinen Formel HHCAHH, wobei der Ort der Oligomere auf der Oberfläche jeweils einen Rückschluß auf ihre Se­ quenz(en) erlaubt.
Bevorzugt ist es zudem, daß die Anordnung mindestens 100 verschiedene Oligomere umfaßt, die jeweils mindestens ei­ ne der Sequenzen DDCGDD, DDTGDD, HHCGHH oder HHCAHH um­ fassen.
In einer besonders bevorzugten Ausführung besteht die O­ berfläche der Anordnung aus Glas. In einer weiteren be­ vorzugten Ausführung besteht die Oberfläche der Anordnung aus Metall oder einem anderen leitfähigen Material. In einer ebenfalls besonders bevorzugten Ausführung ist die Anordnung dadurch gekennzeichnet, daß die Oberfläche das Target eines MALDI-Massenspektrometers ist.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist zudem die Ver­ wendung einer Anordnung von PNA (Peptide Nucleic Acids)- oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche, umfassend Oli­ gomere aus jeweils zwischen 6 und 20 Monomeren (oder Nukleobasen), die wiederum Sequenzen der allgemeinen For­ mel DDCGDD und/oder der allgemeinen Formel DDTGDD und/oder der allgemeinen Formel HHCGHH und/oder der all­ gemeinen Formel HHCAHH umfassen, wobei der Ort der Oligo­ mere auf der Oberfläche jeweils einen Rückschluß auf ihre Sequenz(en) erlaubt, zur Hybridisierung von DNA- Fragmenten, die zuvor amplifiziert wurden.
Bevorzugt ist dabei der Einsatz von DNA-Fragmenten, die mittels der Polymerase-Kettenreaktion hergestellt wurden.
Bevorzugt ist zudem die Verwendung einer Anordnung von PNA (Peptide Nucleic Acids)- oder DNA-Oligomeren auf ei­ ner Oberfläche, umfassend Oligomere aus jeweils zwischen 6 und 20 Monomeren (oder Nukleobasen), die wiederum Se­ quenzen der allgemeinen Formel DDCGDD und/oder der allge­ meinen Formel DDTGDD und/oder der allgemeinen Formel HHCGHH und/oder der allgemeinen Formel HHCAHH umfassen, wobei der Ort der Oligomere auf der Oberfläche jeweils einen Rückschluß auf ihre Sequenz(en) erlaubt, zur Hybri­ disierung von DNA, die zuvor mit einer Bisulfitlösung (o­ der Hydrogensulfit, Disulfit) behandelt wurde. Bevorzugt wurde die DNA amplifiziert.
In der Fig. 1 ist die erfindungsgemäße Verwendung der Oligomer-Arrays zur Detektion von Cytosin- Methylierungsmustern in genomischer DNA beispielhaft er­ läutert.
In der Fig. 1 habe die Buchstaben H, D und N die folgen­ de Bedeutung:
H stellt eine der Basen Adenin (A), Cytosin (C) oder Thymin (T),
D eine der Basen Adenin (A), Guanin (G) oder Thymin (T) und
N eine der Basen Adenin (A), Guanin (G), Cytosin (C) oder Thymin (T) dar.
DNA-Sequenzen, welche sich lediglich in der Methylierung von Cytosin unterscheiden, ergeben nach der Behandlung mit Bisulfit eine veränderte Sequenz der Nukleobasen. Das methylierte Cytosin wird durch die Bisulfitbehandlung nicht verändert, während das nicht methylierte Cytosin zu Thymin umgewandelt wird. Dies führt nach der Amplifikati­ on zu unterschiedlichen Sequenzen, welche dann an ver­ schiedenen Stellen des Oligomer-Arrays binden, an denen komplementäre Sequenzen vorhanden sind. Somit ist, da die Sequenzen auf dem Oligomer-Array bekannt sind, ein Rückschluß auf eine in der ursprünglichen DNA vorhandenen Methlylierung des Cytosins möglich.

Claims (8)

1. Verwendung eines Oligomer-Arrays mit PNA-(Peptide Nucleic Acids)- und/oder DNA-Oligomeren auf einer O­ berfläche, umfassend Oligomere aus jeweils zwischen 6 und 20 Monomeren oder Nukleobasen, wobei diese je­ weils mindestens eine Sequenz der allgemeinen Formel DDCGDD oder der allgemeinen Formel DDTGDD oder der allgemeinen Formel HHCGHH oder der allgemeinen Formel HHCAHH umfassen, wobei
H eine der Basen Adenin (A), Cytosin (C) oder Thymin (T) bedeutet und
D eine der Basen Adenin (A), Guanin (G) oder Thy­ min (T) darstellt,
und wobei der Ort der Oligomere auf der Oberfläche mit der Sequenz der Oligomere korreliert ist, zur De­ tektion von Cytosin-Methylierungen in genomischer DNA.
2. Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Oligomer-Array verwendet, dessen Oberflä­ che eben ist und bei welchem die Oligomere in einem rechtwinkligen oder hexagonalen Raster, das die Zu­ ordnung zu Koordinaten erlaubt, darauf angeordnet sind.
3. Verwendung nach Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, daß man eine Oligomer-Array verwendet, umfassend die Sequenzen der allgemeinen Formel DDCGDD und der all­ gemeinen Formel DDTGDD und der allgemeinen Formel HHCGHH und der allgemeinen Formel HHCAHH.
4. Verwendung nach Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, daß man ein Oligomer-Array einsetzt, umfassend die Sequenzen der allgemeinen Formel DDCGDD und der all­ gemeinen Formel DDTGDD oder Sequenzen der allgemeinen Formel HHCGHH und der allgemeinen Formel HHCAHH.
5. Verwendung nach Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, daß man ein Oligomer-Array verwendet, das mindestens 100 verschiedene Oligomere umfaßt.
6. Verwendung nach Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, daß man ein Oligomer-Array verwendet, dessen Oberflä­ che aus Glas ist.
7. Verwendung nach Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, daß man ein Oligomer-Array einsetzt, dessen Oberflä­ che aus Metall oder einem anderen leitfähigen Materi­ al ist.
8. Verwendung nach Anspruch 7 dadurch gekennzeichnet, daß man ein Oligomer-Nukleotid verwendet, dessen O­ berfläche das Target eines MALDI-Massenspektrometers ist.
DE19957827A 1999-11-25 1999-11-25 Verwendung eines Oligomer-Arrays mit PNA- und/oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche Expired - Fee Related DE19957827C2 (de)

Priority Applications (20)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19957827A DE19957827C2 (de) 1999-11-25 1999-11-25 Verwendung eines Oligomer-Arrays mit PNA- und/oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche
IL14980100A IL149801A0 (en) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer array with pna and/or dna oligomers on a surface
EP07090045A EP1816216A3 (de) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer-Array mit PNA-und/oder Oligomeren auf einer Oberfläche
US10/148,140 US6936419B1 (en) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer array with PNA and/or DNA oligomers on a surface
JP2001539907A JP2003514570A (ja) 1999-11-25 2000-11-24 表面上においてｐｎａ−および／またはｄｎａ−オリゴマーを用いたオリゴマー配列
NZ51854800A NZ518548A (en) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer array with PNA and/or DNA oligomers on a surface
PCT/DE2000/004301 WO2001038565A2 (de) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer-array mit pna- und/oder dna-oligomeren auf einer oberfläche
SI200030961T SI1232287T1 (sl) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomerna mreža s PNA- in/ali DNA-oligomeri na površini
MXPA02005221A MXPA02005221A (es) 1999-11-25 2000-11-24 Arreglo de oligomeros con oligomeros de adn y/o adn sobre una superficie.
AU28270/01A AU784238B2 (en) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer array with PNA and/or DNA oligomers on a surface
AT00993178T ATE362548T1 (de) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer-array mit pna- und/oder dna-oligomeren auf einer oberfläche
CN008161941A CN1413263B (zh) 1999-11-25 2000-11-24 表面上带有pna和/或dna寡聚物的寡聚物阵列
ES00993178T ES2287049T3 (es) 1999-11-25 2000-11-24 Agrupacion de oligomeros, con oligomeros de anp y/o de adn sobre una superficie.
DK00993178T DK1232287T3 (da) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer array med PNA og/eller DNA-oligomerer på en overflade
CA2390312A CA2390312C (en) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer array with pna and/or dna oligomers on a surface
EP00993178A EP1232287B1 (de) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer-array mit pna- und/oder dna-oligomeren auf einer oberfläche
PT00993178T PT1232287E (pt) 1999-11-25 2000-11-24 Arranjo de oligómeros com oligómeros de pna e/ou de adn sobre uma superfície
DE50014333T DE50014333D1 (de) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer-array mit pna- und/oder dna-oligomeren auf einer oberfläche
IS6364A IS2445B (is) 1999-11-25 2002-04-26 Fáliðu fylki með PNA og/eða DNA fáliður á yfirborði.
JP2006350139A JP2007175051A (ja) 1999-11-25 2006-12-26 表面上においてｐｎａ−および／またはｄｎａ−オリゴマーを用いたオリゴマーアレイ

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19957827A DE19957827C2 (de) 1999-11-25 1999-11-25 Verwendung eines Oligomer-Arrays mit PNA- und/oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE19957827A1 DE19957827A1 (de) 2001-06-21
DE19957827C2 true DE19957827C2 (de) 2003-06-12

Family

ID=7930999

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19957827A Expired - Fee Related DE19957827C2 (de) 1999-11-25 1999-11-25 Verwendung eines Oligomer-Arrays mit PNA- und/oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche
DE50014333T Expired - Lifetime DE50014333D1 (de) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer-array mit pna- und/oder dna-oligomeren auf einer oberfläche

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE50014333T Expired - Lifetime DE50014333D1 (de) 1999-11-25 2000-11-24 Oligomer-array mit pna- und/oder dna-oligomeren auf einer oberfläche

Country Status (16)

Country Link
US (1) US6936419B1 (de)
EP (2) EP1232287B1 (de)
JP (2) JP2003514570A (de)
CN (1) CN1413263B (de)
AT (1) ATE362548T1 (de)
AU (1) AU784238B2 (de)
CA (1) CA2390312C (de)
DE (2) DE19957827C2 (de)
DK (1) DK1232287T3 (de)
ES (1) ES2287049T3 (de)
IL (1) IL149801A0 (de)
IS (1) IS2445B (de)
MX (1) MXPA02005221A (de)
NZ (1) NZ518548A (de)
PT (1) PT1232287E (de)
WO (1) WO2001038565A2 (de)

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2001247414A1 (en) 2000-03-14 2001-09-24 Active Motif Oligonucleotide analogues, methods of synthesis and methods of use
AUPR142500A0 (en) * 2000-11-13 2000-12-07 Human Genetic Signatures Pty Ltd A peptide nucleic acid-based assay for the detection of specific nucleic acid sequences
DE10142643A1 (de) * 2001-08-31 2003-04-24 Clondiag Chip Tech Gmbh Detektion von Wechselwirkungen auf Sonden-Arrays
DE10145226A1 (de) * 2001-09-13 2003-04-10 Lifebits Ag Herstellung von trägergebundenen Molekülen
US20110151438A9 (en) 2001-11-19 2011-06-23 Affymetrix, Inc. Methods of Analysis of Methylation
CA2442438C (en) * 2002-10-04 2012-06-19 Nisshinbo Industries, Inc. Oligonucleotide-immobilized substrate for detecting methylation
US7799525B2 (en) 2003-06-17 2010-09-21 Human Genetic Signatures Pty Ltd. Methods for genome amplification
ATE419394T1 (de) 2003-09-04 2009-01-15 Human Genetic Signatures Pty Nukleinsäurenachweistest
EP1568786A3 (de) * 2004-02-13 2007-08-29 Affymetrix, Inc. (A US Entity) Analyse der Methylierung mittels Nukleinsäurearrays
US8168777B2 (en) 2004-04-29 2012-05-01 Human Genetic Signatures Pty. Ltd. Bisulphite reagent treatment of nucleic acid
CN101056883B (zh) 2004-09-10 2012-10-10 人类遗传标记控股有限公司 包括含有嵌入性假核苷酸(ipn)的嵌入性核酸(ina)的扩增阻断剂
EP3061833B1 (de) 2004-09-30 2018-03-14 Epigenomics AG Verfahren zur bereitstellung von dna-fragmenten aus einer archivierten probe
CA2589668C (en) 2004-12-03 2014-09-02 Human Genetic Signatures Pty Ltd Methods for simplifying microbial nucleic acids by chemical modification of cytosines
WO2006088978A1 (en) 2005-02-16 2006-08-24 Epigenomics, Inc. Method for determining the methylation pattern of a polynucleic acid
JP5133238B2 (ja) 2005-04-15 2013-01-30 エピゲノミックス アクチェンゲゼルシャフト 遠隔サンプル由来のｄｎａ断片を提供する方法
CN101203618B (zh) 2005-05-26 2013-03-13 人类遗传标记控股有限公司 使用含有非常规碱基的引物的等温链置换扩增
US8343738B2 (en) 2005-09-14 2013-01-01 Human Genetic Signatures Pty. Ltd. Assay for screening for potential cervical cancer
KR101211747B1 (ko) 2005-09-22 2012-12-12 이데미쓰 고산 가부시키가이샤 산화물 재료 및 스퍼터링 타겟
EP3095878A1 (de) 2005-11-17 2016-11-23 Epigenomics AG Verfahren zur bestimmung des dna-methylierungsgrads einer cpg-position in identischen zellen in einer gewebeprobe
US7901882B2 (en) * 2006-03-31 2011-03-08 Affymetrix, Inc. Analysis of methylation using nucleic acid arrays
CA2660286A1 (en) 2006-08-09 2008-02-21 Homestead Clinical Corporation Organ-specific proteins and methods of their use
EP2152902A2 (de) 2007-06-08 2010-02-17 Epigenomics AG Verfahren zur methylierungsanalyse
JP5431351B2 (ja) 2007-11-27 2014-03-05 ヒューマン ジェネティック シグネチャーズ ピーティーワイ リミテッド バイサルファイト修飾された核酸を増幅およびコピーするための酵素
US8404242B2 (en) 2009-03-16 2013-03-26 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods comprising histidyl-tRNA synthetase splice variants having non-canonical biological activities
WO2010120509A2 (en) 2009-03-31 2010-10-21 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods comprising aspartyl-trna synthetases having non-canonical biological activities
JP6066900B2 (ja) 2010-04-26 2017-01-25 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド システイニルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見
AU2011248614B2 (en) 2010-04-27 2017-02-16 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl tRNA synthetases
CA2797271C (en) 2010-04-28 2021-05-25 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of alanyl trna synthetases
EP2563383B1 (de) 2010-04-29 2017-03-01 Atyr Pharma, Inc. Innovative entdeckung therapeutischer, diagnostischer und antikörperhaltiger zusammensetzungen im zusammenhang mit proteinfragmenten von valyl-trna-synthetasen
WO2011139854A2 (en) 2010-04-29 2011-11-10 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of asparaginyl trna synthetases
US9034321B2 (en) 2010-05-03 2015-05-19 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-alpha-tRNA synthetases
CA2797277C (en) 2010-05-03 2021-02-23 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of arginyl-trna synthetases
CN103140233B (zh) 2010-05-03 2017-04-05 Atyr 医药公司 与甲硫氨酰‑tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的发现
CN102985103A (zh) 2010-05-04 2013-03-20 Atyr医药公司 与p38多-tRNA合成酶复合物相关的治疗、诊断和抗体组合物的创新发现
JP6396656B2 (ja) 2010-05-14 2018-09-26 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド フェニルアラニルβｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見
US9034598B2 (en) 2010-05-17 2015-05-19 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of leucyl-tRNA synthetases
CN103096913B (zh) 2010-05-27 2017-07-18 Atyr 医药公司 与谷氨酰胺酰‑tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的创新发现
AU2011261486B2 (en) 2010-06-01 2017-02-23 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of lysyl-tRNA synthetases
JP6116479B2 (ja) 2010-07-12 2017-04-19 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド グリシルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見
WO2012027611A2 (en) 2010-08-25 2012-03-01 Atyr Pharma, Inc. INNOVATIVE DISCOVERY OF THERAPEUTIC, DIAGNOSTIC, AND ANTIBODY COMPOSITIONS RELATED TO PROTEIN FRAGMENTS OF TYROSYL-tRNA SYNTHETASES
MX350658B (es) 2011-09-07 2017-09-13 Human Genetic Signatures Pty Ltd Ensayo de detección molecular.
WO2013123432A2 (en) 2012-02-16 2013-08-22 Atyr Pharma, Inc. Histidyl-trna synthetases for treating autoimmune and inflammatory diseases
BR112015012239B1 (pt) 2012-11-27 2022-07-19 Pontificia Universidad Católica De Chile Método in vitro de diagnóstico de câncer de tireoide

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998015652A1 (en) * 1996-10-04 1998-04-16 Brax Genomics Limited Nucleic acid sequencing by adaptator ligation
WO1998020020A2 (en) * 1996-11-06 1998-05-14 Sequenom, Inc. High density immobilization of nucleic acids
WO1998048047A2 (en) * 1997-04-21 1998-10-29 Brax Group Limited Characterising dna
WO1999005320A1 (en) * 1997-07-22 1999-02-04 Rapigene, Inc. Multiple functionalities within an array element and uses thereof
WO1999005321A1 (en) * 1997-07-22 1999-02-04 Rapigene, Inc. Amplification and other enzymatic reactions performed on nucleic acid arrays
WO1999029898A2 (de) * 1997-12-05 1999-06-17 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Verfahren zur identifikation von nucleinsäuren durch matrix-assistierte laser desorptions/ionisations massenspektrometrie
WO1999029897A1 (de) * 1997-12-05 1999-06-17 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Verfahren zur identifikation von nucleinsäuren durch elektrospray massenspektrometrie
WO1999057323A1 (en) * 1998-05-04 1999-11-11 Baylor College Of Medicine Chemically modified nucleic acids and methods for coupling nucleic acids to solid support
WO1999057311A2 (en) * 1998-04-30 1999-11-11 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Novel method for the identification of clones conferring a desired biological property from an expression library

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5695926A (en) * 1990-06-11 1997-12-09 Bio Merieux Sandwich hybridization assays using very short capture probes noncovalently bound to a hydrophobic support
US5474796A (en) * 1991-09-04 1995-12-12 Protogene Laboratories, Inc. Method and apparatus for conducting an array of chemical reactions on a support surface
WO1993025563A1 (en) * 1992-06-17 1993-12-23 City Of Hope A method of detecting and discriminating between nucleic acid sequences
US5824473A (en) * 1993-12-10 1998-10-20 California Institute Of Technology Nucleic acid mediated electron transfer
US5589330A (en) * 1994-07-28 1996-12-31 Genzyme Corporation High-throughput screening method for sequence or genetic alterations in nucleic acids using elution and sequencing of complementary oligonucleotides
US5514551A (en) * 1994-10-14 1996-05-07 Gen-Probe Incorporated Compositions for the detection of Chlamydia trachomatis
US6017704A (en) * 1996-06-03 2000-01-25 The Johns Hopkins University School Of Medicine Method of detection of methylated nucleic acid using agents which modify unmethylated cytosine and distinguishing modified methylated and non-methylated nucleic acids
DE19754482A1 (de) * 1997-11-27 1999-07-01 Epigenomics Gmbh Verfahren zur Herstellung komplexer DNA-Methylierungs-Fingerabdrücke
US6664045B1 (en) * 1998-06-18 2003-12-16 Boston Probes, Inc. PNA probes, probe sets, methods and kits pertaining to the detection of microorganisms
US6605432B1 (en) * 1999-02-05 2003-08-12 Curators Of The University Of Missouri High-throughput methods for detecting DNA methylation
DE19951189C2 (de) * 1999-10-15 2003-11-06 Epigenomics Ag Verfahren zur Unterscheidung von 5-Position-Methylierungsänderungen von Cytosin-Basen und Cytosin-zu-Thymin-Mutationen und zum Nachweis von single nucleotide polymorphisms (SNPs) oder Punktmutation in genomischer DNA

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998015652A1 (en) * 1996-10-04 1998-04-16 Brax Genomics Limited Nucleic acid sequencing by adaptator ligation
WO1998020020A2 (en) * 1996-11-06 1998-05-14 Sequenom, Inc. High density immobilization of nucleic acids
WO1998048047A2 (en) * 1997-04-21 1998-10-29 Brax Group Limited Characterising dna
WO1999005320A1 (en) * 1997-07-22 1999-02-04 Rapigene, Inc. Multiple functionalities within an array element and uses thereof
WO1999005321A1 (en) * 1997-07-22 1999-02-04 Rapigene, Inc. Amplification and other enzymatic reactions performed on nucleic acid arrays
WO1999029898A2 (de) * 1997-12-05 1999-06-17 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Verfahren zur identifikation von nucleinsäuren durch matrix-assistierte laser desorptions/ionisations massenspektrometrie
WO1999029897A1 (de) * 1997-12-05 1999-06-17 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Verfahren zur identifikation von nucleinsäuren durch elektrospray massenspektrometrie
WO1999057311A2 (en) * 1998-04-30 1999-11-11 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Novel method for the identification of clones conferring a desired biological property from an expression library
WO1999057323A1 (en) * 1998-05-04 1999-11-11 Baylor College Of Medicine Chemically modified nucleic acids and methods for coupling nucleic acids to solid support

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Anal.Chem. 69 (1997) 2438-2443 *
Anal.Chem. 69 (1997) 4540-4546 *
Angew.Chem. 111 (1999) 3039-3043 *
Chem.Abstr. 131 (1999) 332581k, (BioMethods (Basel) 10 (1999) 399-415) *
MEDLINE AN 96375669 (Genetic Analysis 13 (1996) 4-14) *
Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96(1999) 10016-10020 *

Also Published As

Publication number Publication date
IS6364A (is) 2002-04-26
DE50014333D1 (de) 2007-06-28
ATE362548T1 (de) 2007-06-15
JP2003514570A (ja) 2003-04-22
WO2001038565A3 (de) 2001-11-15
IS2445B (is) 2008-11-15
EP1232287B1 (de) 2007-05-16
EP1816216A3 (de) 2009-06-03
WO2001038565A2 (de) 2001-05-31
NZ518548A (en) 2004-12-24
US6936419B1 (en) 2005-08-30
IL149801A0 (en) 2002-11-10
AU784238B2 (en) 2006-02-23
AU2827001A (en) 2001-06-04
PT1232287E (pt) 2007-08-21
EP1816216A2 (de) 2007-08-08
CN1413263A (zh) 2003-04-23
JP2007175051A (ja) 2007-07-12
CN1413263B (zh) 2012-07-04
EP1232287A2 (de) 2002-08-21
CA2390312A1 (en) 2001-05-31
ES2287049T3 (es) 2007-12-16
DK1232287T3 (da) 2007-09-24
CA2390312C (en) 2011-05-31
MXPA02005221A (es) 2004-08-23
DE19957827A1 (de) 2001-06-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE19957827C2 (de) Verwendung eines Oligomer-Arrays mit PNA- und/oder DNA-Oligomeren auf einer Oberfläche
DE69738206T2 (de) DNA-Diagnostik mittels Massenspektrometrie
EP1036202B1 (de) Verfahren zur identifikation von nucleinsäuren durch matrix-assistierte laser desorptions/ionisations massenspektrometrie
DE69626196T3 (de) Dna-diagnostik mittels massenspektrometrie
DE10010280B4 (de) Verfahren zur Detektion von Cytosin-Methylierung in DNA Proben
DE69838519T2 (de) Massenmarkierte Hybridisierungssonden
DE10010281A1 (de) Ligase/Polymerase-Verfahren zur Detektion von Cytosin-Methylierung in DNA Proben
EP1204765B1 (de) Verfahren zur relativen quantifizierung der methylierung von cytosin basen in dna-proben
DE10010282B4 (de) Verfahren zur Detektion von Cytosin-Methylierung in DNA Proben
EP1204763B1 (de) Verfahren zur charakterisierung von nukleinsäurefragmenten
DE10112387A1 (de) Massenspektrometrische Genotypisierung
DE19963536C2 (de) Verfahren zur Analyse von Nukleinsäuresequenzen
AU7613101A (en) DNA diagnostics based on mass spectrometry

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
8304 Grant after examination procedure
8364 No opposition during term of opposition
R082 Change of representative

Representative=s name: DR. VOLKER VOSSIUS PATENT- UND RECHTSANWALTSKA, DE

Representative=s name: ZSP PATENTANWAELTE PARTNERSCHAFTSGESELLSCHAFT, DE

Representative=s name: ZSP PATENTANWAELTE PARTG MBB, DE

R119 Application deemed withdrawn, or ip right lapsed, due to non-payment of renewal fee

Effective date: 20130601