DE10006432A1 - Verfahren zum Nachweis von Helicobacter pylori in Stuhl- und Speichelproben - Google Patents

Verfahren zum Nachweis von Helicobacter pylori in Stuhl- und Speichelproben

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Abstract

Verfahren und Testsystem zum Nachweis von Helicobacter und/oder Camphylobacter in Stuhl-, Speichel- und Sekretproben durch einen Doppelantikörper-Sandwich-Bindungsassay, wobei mindestens zwei verschiedene Primärantikörper eingesetzt werden, von denen der erste Helicobacter- oder Camphylobacter-Antigen erkennt und der zweite menschliches Immunglobulin-A, bevorzugt sekretorisches Human-IgA und Human-IgA2. Der Sekundärantikörper ist markiert, bspw. mit Biotin, Fluorescein, alkalischer Phosphatase oder Meerrettichperoxidase. Der erste Primärantikörper ist bevorzugt eine Mischung verschiedener polykonaler Antikörper gegen unterschiedliche Helicobacter pylori-Stämme.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Nachweis von Erreger­ antigenen in Stuhl- und Speichelproben.
Die menschliche Magenschleimhaut ist vielfach von Bakterien der Gattungen Helicobacter oder Camphylobacter besiedelt. Die Infektion mit diesen Bakterien erfolgt wahrscheinlich von Mensch zu Mensch, aber auch Trinkwasser und Nahrungsmittel werden als Infektionsquellen nicht ausgeschlossen. In Deutsch­ land sind etwa 10% der Schulkinder, 30% der Dreißigjährigen und etwa 75% der Senioren mit Helicobacter pylori infiziert. Weltweit tragen ca. 50% der Menschen diese Infektion. 80% der Gastriden, 95% der Ulcus duodeni- und 70% der Ulcus ventri­ culi-Fälle werden durch Helicobacter pylori verursacht. Zudem gilt die chronische H. pylori-Gastritis (Typ-B-Gastritis) als Präkanzerose für das Magen-Adenokarzinom und das gastrische Lymphom. Helicobacter pylori ist gemäß WHO ein Kanzerogen der höchsten Krebsrisikoklasse.
Nur ein kleiner Teil der H. pylori-infizierten Personen ent­ wickelt Symptome. Viele leben trotz einer Gastritis ohne nennenswerte Beschwerden oder sie schreiben die eher unspezi­ fischen Symptome anderen Ursachen zu. Eine akute H. pylori- Gastritis äußert sich durch unbestimmte Schmerzen im Ober- und Mittelbauch, Druck- und Völlegefühl, saures Aufstoßen, Sodbrennen sowie durch Übelkeit und Brechreiz. Bei nahezu allen Patienten mit einer Typ-B-Gastritis kann eine H. pylori- Infektion nachgewiesen werden. Trotz der zumeist massiven Immunreaktion wurde bei ihnen die Infektion chronisch. Ob sich ein Ulkus entwickelt, hängt ab vom Immunsystem des Patienten und von der Aggressivität der Bakterien. Spontanhei­ lungen sind aber selten. In der Regel bleibt eine H. pylori- Infektion, wenn sie nicht therapiert wird, das ganze Leben bestehen.
Eine H. pylori-Infektion kann diagnostiziert werden durch Anzucht des Erregers aus einer Antrum- oder Corpus-Biopsie oder durch Histologie dieses Gewebes. Weitere diagnostische Verfahren sind der CLO-Test (camphylobacter like organism) bzw. der Urease-Harnstofftest, der 13C-Isotopen-Atemtest, der Nachweis von Antikörpern gegen H. pylori im Serum, der PCR- Nachweis von Helicobacter-DNA in einer Magensaft- oder Stuhl­ probe und der Nachweis von Helicobacter in einer Stuhlprobe.
US 5 716 791 (Larka et al.) und EP 0 806 667 (Meridian Dia­ gnostics Inc.) beschreiben einen Helicobacter-Immunoassay auf H. pylori-Antigene in einer Stuhlprobe. Der Assay beruht auf zwei affinitätsgereinigten polyklonalen Antikörpern gegen H. pylori-Antigen. Ferner gibt es von Connex GmbH, Martinsried, DE, einen Instanttest, der auf einer Lateralfluss-Chromatogra­ phie goldmarkierter monoklonaler Antikörper gegen H. pylori- Stuhlantigene basiert. Diese sogenannten HpSA-Tests (Helico­ bacter pylori Stool Antigen) haben zwar in verschiedenen klinischen Studien eine gute Übereinstimmung mit anderweitigen diagnostizierten Fällen ergeben, ein hoher Prozentsatz der Untersuchungen führt aber zu keiner klaren Aussage. Der HpSA- Test ist zudem für die Kontrolle einer Eradikationstherapie ungeeignet, da er nur bei abundanten Mengen H. pylori-Antigen im Stuhl funktioniert. Die weiteren diagnostischen Verfahren sind zum Teil sehr aufwendig, für den Patienten belastend oder zu teuer für Routineuntersuchungen. Nachteilig an den serologischen Verfahren ist, dass sie keine Therapiekontrolle erlauben, da die Antikörpertiter noch Monate nach einer Eradikation der Bakterien hoch bleiben. Eine Kontrolle der Therapie ist aber essentiell, da gegen die zur Behandlung üblicherweise eingesetzten Antibiotika wie Clarithromycin, Metronidazol, Amoxicillin, Omeprazol oder Protonenpumpenhemmer Resistenzen vorliegen können. Die Therapie der Infektionen durch Antibiotika und naturheilkundlichen Alternativen verlangt somit ein einfaches, zuverlässiges und empfindliches Test­ verfahren auf H. pylori.
Diese Aufgabe wird gelöst durch einen Immunoassay gemäß An­ spruch 1. Bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung sind in den Unteransprüchen beschrieben.
Das erfindungsgemäße Verfahren zum Nachweis von Erregerantige­ nen in einer Probe ist gekennzeichnet durch das Aufnehmen und Suspendieren einer auf den Erreger zu untersuchenden menschlichen Probe in einem Probenpuffer; das Zusammenbringen des Probenpuffers mit den Erregerantigen mit einer festen Phase, an der mindestens zwei verschiedene Primärantikörper gebunden sind, von denen einer Antigene des Erregers und der andere menschliches Immunglobulin zu binden vermag; Waschen der festen Phase von unspezifisch gebundenen Antigenen; Zusammenbringen der festen Phase mit einem Sekundärantikörper, der spezifisch Antigene des Erregers erkennt und Bestimmen der Menge an gebundenem Sekundärantikörper.
Die Menge des an die feste Phase gebundenen Sekundärantikörpers kann bestimmt werden beispielsweise durch eine Markierung des Antikörpers. Die Markierung kann eine Radioaktivität sein, eine lumineszierende oder fluoreszierende Gruppe, eine Gruppe wie Biotin, die von einem weiteren Molekül wie Streptavidin gebunden werden kann, oder ein Enzym wie Peroxidase, das eine Nachweisreaktion katalysiert. Die Menge an gebundenem Sekundärantikörper kann auch durch einen weiteren Antikörper bestimmt werden, der den Typ des Sekundärantikörpers spezifisch erkennt und eine der vorgenannten Markierungen trägt.
Der an der festen Phase gebundene zweite Primärantikörper gegen menschliche Immunglobuline ist bevorzugt ein Antikörper, welcher Human-IgA und besonders bevorzugt sekretorisches Human- IgA bindet, das in den Speichel und im Dickdarm sekretiert wird. Die Bezeichnung sekretorisches Human-IgA umfasst hier Human-IgA und ggf. auch die sogenannte sekretorische Komponente (MW: 70 kDa), die von den Epithelzellen für den Transport und zum Schutz des IgA vor proteolytischen Enzymen produziert wird. Besonders bevorzugt sind Antikörper gegen IgA2, da Helicobacter und auch andere Mikroorganismen sIgA1-spaltende Proteasen erzeugen. Ganz besonders bevorzugt ist ein Gemisch zweier Primärantikörper, welche IgA1 und IgA2 spezifisch binden.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist der an der festen Phase gebundene erst Primärantikörper ein polyklonaler Kaninchen-Anti-H. pylori-Antikörper. Der zweite an der festen Phase gebundene Primärantikörper ist ein auf Kreuzreaktivitäten getesteter, polyklonaler Ziege-Anti-Human- sIgA-Antikörper. Der Sekundärantikörper ist ein Biotin-konju­ gierter Kaninchen-Anti-H. pylori-Antikörper, so dass die Menge an gebundenem Sekundärantikörper über die Bindung von Peroxi­ dase-konjugiertem Streptavidin und eine Farbreaktion mit Tetra­ methylbenzidin bestimmt werden kann.
In einer zweiten bevorzugten Ausführungsform ist der erste an der festen Phase gebundene Primärantikörper ein Kaninchen­ anti-H. pylori-Antikörper, der zweite Primärantikörper ein Kaninchen-anti-Human-sIgA-Antikörper und der Sekundärantikörper ein polyklonaler Meerrettichperoxidase-konjugierter Ziege-Anti- H. pylori-Antikörper. Es können aber auch andere Immunglobuline verwendet werden aus Pferd, Rind, Schwein, Schaf, Ziege, Kaninchen, Meerschweinchen, Ratte, Maus oder einem anderen Tier. Es ist besonders darauf zu achten, dass der zweite Primärantikörper für menschliches Immunglobulin nicht den Sekundärantikörper gegen das Erregerantigen in der Speichel- oder Stuhlprobe bindet. Die Antikörper können im Prinzip monoklonal sein. Insbesondere kann der zweite Primärantikörper ein monoklonaler Antikörper für Human-IgA2 sein. Es empfiehlt sich, mehrere monoklonale Antikörper zu verwenden, die verschiedene Epitope des Erregers bzw. der menschlichen Immunglobuline erkennen.
Testprinzip am Beispiel eines ELISA
Der erfindungsgemäße ELISA (enzyme-linked immunosorbens assay) dient der qualitativen und quantitativen Bestimmung von H. pylori-Antigen in Stuhl- und Speichelproben. Das H. pylori- Antigen wird in einem ersten Schritt aus der Probe freigesetzt und durch einen bevorzugt polyklonalen Anti-H. pylori-Antikörper gebunden, welcher in üblicher Weise an eine Mikrotiterplatte oder eine andere feste Phase gebunden ist. An der festen Phase ist zudem ein zweiter Primärantikörper fixiert, welcher Human- Immunglobuline und bevorzugt menschliches sekretorisches IgA erkennt. Da H. pylori-Antigene in einer Stuhl- oder Speichel­ probe mit dem körpereigenen menschlichen Immunsystem in Berüh­ rung gekommen sind, wurden einige oder alle H. pylori-Epitope bereits von menschlichen Immunglobulinen gebunden und sind für eine Bindung durch den ersten Primärantikörper gegen den Erreger nicht mehr zugänglich. Von den zweiten Primärantikörper gegen menschliches Immunglobulin werden aber dennoch die Erregerantigene in der Stuhl- oder Speichelprobe, selbst wenn gegen diese bereits eine Immunreaktion besteht, an der festen Phase konzentriert und gebunden. Es werden also einerseits H. pylori-Antigene direkt gebunden und andererseits indirekt über ihre Bindung an sekretiertes menschliches Immunglobulin im Speichel oder Magendarmtrakt. Im zweiten Schritt wird dann gebundenes H. pylori-Antigen unmittelbar durch Anti-H. pylori- Sekundärantikörper detektiert. Über ein geeignetes System wird dann die Menge an gebundenem Sekundärantikörper quanti­ fiziert.
Durch die hohe Spezifität des Senkundärantikörpers gegen H. pylori-Antigen werden falsch positive Befunde ausgeschlossen. Die Gesamtspezifität eines Doppelantikörperassays wird nämlich im Wesentlichen von der Spezifität des Sekundärantikörpers bestimmt. Dass im ersten Bindeschritt auch menschliche sekretorische Antikörper mit Erregerantigen gebunden werden, erhöht im Fall von Helicobacter pylori nicht nur die Empfindlichkeit, sondern auch die Bandbreite des Tests. Besonders erstaunlich ist, dass offenbar in einer erheblichen Zahl der Fälle alle immunogenen Epitope des Helicobacter pylori von der bestehenden menschlichen Immunreaktion erkannt werden. Offenbar ist bei Helicobacter-Organismen die Zahl der immunogenen Epitope begrenzt, so dass die vom menschlichen Immunsystem und von den tierischen Primär- und Sekundärantikörpern des Doppelantikörper-Bindungsassays erkannten Erregerepitope oftmals identisch sind. Dies gilt insbesondere bei einer H. pylori-Besiedelung der Mundhöhle und für die Spätphase einer Eradikationstherapie, in der die menschliche Immunreak­ tion die nunmehr verminderte Menge an H. pylori-Epitopen, die in der Stuhl- oder Speichelprobe noch vorhanden sind, abdeckt. Durch das erfindungsgemäße Testprinzip lassen sich geringe und auch maskierte Mengen H. pylori-Antigen erfassen.
Das Vorkommen von Helicobacter pylori im Speichel erregte bislang nur wissenschaftliches Interesse hinsichtlich des mutmaßlichen Übertragungsweges (Namavar F. et al., Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 1995, 14 (3), pp. 234-7; Shimada T. et al., Lancet, 1994, 343(8913), pp. 1636-7). Durch das erfindungsgemäße Verfahren wird die untere Nachweisgrenze für H. pylori nun so tief gelegt, dass auch eine Untersuchung des Speichels die Diagnose einer H. pylori-Infektion erlaubt. Insbesondere für die Therapiekontrolle ist es wichtig, den Speichel des Patienten auf H. pylori-Antigene zu untersuchen. Die Untersuchungen der Anmelderin ergaben, dass sich im Mund­ raum vermutlich unter Metallplomben und Zahnprothesen H. pylori-Infektionsnester befinden, welche eine herkömmliche Eradikationstherapie überdauern können und die zu einem erneuten Befall der Magenschleimhaut führen. Eine Eradikations­ therapie kann somit nur als abgeschlossen gelten, wenn sowohl in der Stuhl- als auch in der Speichelprobe keine H. pylori- Antigene mehr nachgewiesen werden können.
Das erfindungsgemäße Sandwich-Testprinzip mit einem zweiten Primärantikörper gegen menschliches Immunglobulin, insbesondere gegen menschliches sekretorisches IgA, ist nicht auf die Ver­ wendung auf einer Mikrotiterplatte beschränkt. Es kann auf vollautomatisierte Verfahren adaptiert werden, welche mit beschichteten Beads bzw. Partikeln arbeiten. Das erfindungs­ gemäße Prinzip mit einem zweiten Primärantikörper gegen sekre­ torisches Human-IgA eignet sich allgemein für die Diagnostik von Erregern, die im Mundraum oder im Magendarmtrakt siedeln und eine massive Immunreaktion hervorrufen.
Im Allgemeinen ist bevorzugt, wenn der erste Primärantikörper ein Pool polyklonaler Antikörper gegen verschiedene Helico­ bacter pylori-Stämme ist. Dieses gilt auch für den Sekundär­ antikörper, da dies die Sicherheit des Tests verbessert.
Die Erfindung und deren Vorteile werden nun an bevorzugten Ausführungsformen, Beispielen und mit Bezug auf die anliegenden Zeichnungen beschrieben. Es zeigt:
Fig. 1 ein Prinzipschema des erfindungsgemäßen Immunoassays auf H. pylori-Antigen;
Fig. 2 eine Variante des erfindungsgemäßen Immunoassays;
BEISPIEL 1 - Nachweis von H. pylori-Antigen in einer Stuhlprobe
Vorbereitung der Stuhlprobe: Es wurde ca. 100 mg Stuhl einge­ wogen und bei Raumtemperatur in 5 ml PBS-Waschpuffer mit 0,1% Triton X-100 (8 mM Na2HPO4, 15 mM M K2H2PO4, 3 mM KCl, 12,5 mM NaCl, 0,1% Triton X-100, 0,02% Thimerosal, pH 7,4) dispergiert. Die Dosierung und Homogenisierung der Stuhlproben erfolgte bevorzugt mit einem Probenvorbereitungssystem der Roche Diagnostik, Mannheim, DE (Best.-Nr. 745804). Das Homogenat wurde in einer Tischzentrifuge 10 Minuten bei 3000 Upm zentri­ fugiert, 1 ml Überstand in ein Eppendorf-Röhrchen überführt und 5 Minuten bei 13000 Upm in einer Eppendorf-Zentrifuge zentrifugiert. Der Überstand wurde direkt in den ELISA-Test eingesetzt.
Vorbereitung der Speichelprobe
Die Speichelprobe wurde 1 : 4 mit Waschpuffer verdünnt und unmittelbar in den Bindungsassay eingesetzt.
Beschichtung der Mikrotiterplatte
Die Vertiefungen einer Mikrotiterplatte wurden mit polyklonalen Antikörpern gegen H. pylori-Antigen und Human-Immunglobulin-A beschichtet. Hierzu wurde in jede Vertiefung jeweils 100 µg käuflicher polyklonaler Kaninchen-Anti-H. pylori-Antikörper (DAKO, Hamburg) gegeben, gelöst in 200 µl 60 mM NaCO3, pH 9,6, und die Platte über Nacht bei 4°C inkubiert. Die Kaninchen-Anti-H. pylori-Antikörper- Lösung in den Vertiefungen wurde entfernt und jede Vertiefung mit 200 µl Waschpuffer (PBS, pH 7,4 mit 0,1% Triton X-100) gewaschen. Dann wurde in jede Vertiefung 100 µg Kaninchen-Anti- Human-sIgA-Antikörper (DAKO, Hamburg) gegeben, gelöst in 200 µl 60 mN NaCO3, pH 9,6 und die Platte eine Stunde bei Raumtemperatur inkubiert. Die Anti-Human-IgA-Antikörper-Lösung in den Vertiefungen wurden entfernt und jede Vertiefung erneut fünfmal mit je 250 µl Waschpuffer gewaschen. Nach dem letzten Waschgang wurden die Vertiefungen der Mikrotiterplatte auf Saugpapier ausgeschlagen.
Bindungsassay
Die Bestimmungen erfolgten alle in Doppelwerten. 100 µl Standard und Probe wurde in Doppelwerten in die anti­ körperbeschichteten Vertiefungen der Mikrotiter pipettiert und eine Stunde unter Schütteln bei Raumtemperatur inkubiert.
Die Lösungen wurden abgenommen und die Vertiefungen der Platte fünfmal mit je 250 µl Waschpuffer gewaschen. Nach dem letzten Waschgang wurde die Mikrotiterplatte auf Saugpapier trocken geschlagen.
Bestimmung der Bindung
Es wurde jeweils 100 µl Biotin­ konjugierter polyklonaler Kaninchen-Anti-H. pylori-Antikörper (1 : 10000; von DAKO, Hamburg) oder Meerrettichperoxidase(HRP)- konjugierte polyklonaler Ziege-Anti-H. pylori-Antikörper, (von KPL, Kirkegaard and Perry Laboratories, Gaithersburg, MD; ein Gemisch aus polyklonalen Antikörper gegen die H. pylori- Stämme ATCC 43504, 43526, 43579), 1 : 1000 verdünnt in Waschpuffer, in die Vertiefungen gegeben und bei Raumtemperatur eine Stunde unter Rütteln inkubiert. Die Lösung wurde aus den Vertiefungen entfernt und jede Vertiefung fünfmal mit 200 µl Waschpuffer gewaschen.
Quantitative Bestimmung
Für die Farbreaktion wurde im Fall des Meerrettichperoxidas-konjugierten Ziege-Anti-H. pylori-Anti­ körpers 100 µl Tetramethylbenzidin(TMB)-Substratlösung (ge­ brauchsfertig von NOVUM Diagnostika GmbH, Dietzenbach, DE) in die Vertiefungen gegeben und nach etwa 20 Minuten die Farbentwicklung durch Zugabe von 50 µl 0,4 M H2SO4 gestoppt. Im Fall des Biotin-gekoppelten Kaninchen-Anti-H. pylori-Anti­ körpers wurde 100 µl Meerrettichperoxidase-konjugiertes Streptavidin (DAKO), 1 : 10000 verdünnt in Waschpuffer, aufgetragen, 1 Stunde bei Raumtemperatur unter Schütteln inkubiert, fünfmal mit Waschpuffer gewaschen und erst dann das Chromogen hinzugefügt. Die Farbentwicklung wurde jeweils bestimmt durch Messung der Extinktion bei 450 nm. Die nach­ stehenden Tabellen 1 und 2 zeigen repräsentative Ergebnisse von gesunden und H. pylori-infizierten Patienten.
BEISPIEL 2 (Vergleich) Immunoassay ohne zweiten Antikörper gegen Human-Immunglobulin-A
Die Vorbereitungen der Stuhl- und Speichelproben und der Bindungsassay erfolgten exakt wie in Beispiel 1, nur dass die jeweiligen Vertiefungen der Mikrotiterplatte ausschließlich mit affinitätsgereinigtem, polyklonalen Kaninchen-Immunglobulin gegen Helicobacter pylori oder mit Kaninchen-Anti-Human-sIgA- Antikörper beschichtet wurde. Alle Wasch-, Beschichtungs- und Bindeschritte sowie die Farbentwicklungen erfolgten parallel auf der gleichen Mikrotiterplatte.
DISKUSSION
Die Ergebnisse in der Tabelle zeigen, dass bei verschiedenen Patienten die in der jeweiligen Stuhl- oder Speichelprobe vorhandenen H. pylori-Antigene vollkommen durch das körpereigene Immunsystem maskiert waren und nicht direkt vom Primärantikör­ per gegen den Erreger gebunden werden konnten. Bei einer solchen Maskierung der Antigene führt ein herkömmlicher Doppel­ antikörper-Immunoassay zu dem falschen Ergebnis, dass keine H. pylori-Infektion vorliegt bzw. nicht mehr vorliegt. In dem hier beschriebenen Verfahren wurden die durch das menschliche Immunsystem maskierten H. pylori-Antigene von Anti-Human-sIgA- Antikörpern an die feste Phase gebunden (siehe Tabelle 2, grau unterlegte Felder). Der Maskierungseffekt war nicht ab­ hängig vom eingesetzten Sekundärantikörper und auch nicht davon, ob es sich bei der Probe um Speichel oder Stuhl handelte. Ferner legen die Ergebnisse nahe, dass sich die Primärbindungen von H. pylori an der festen Phase über Anti- Human-sIgA-Antikörper oder Anti-H. pylori-Antikörper in vielen Fällen ausschließen, dass also deutlich eine Entweder-Oder- Situation gegeben war. Die mögliche Primärbindung der H. pylori- Antigene an die feste Phase über die Bindung an menschliches Immunglobulin-A ist somit essentieller Bestandteil der erfin­ dungsgemäßen Diagnostik von H. pylori.

Claims (9)

1. Verfähren zum Nachweis von krankheitserregenden Organismen in Stuhl-, Speichel- und Sekretproben durch einen Doppel­ antikörper-Sandwich-Bindungsassay, gekennzeichnet durch
Aufnehmen oder Dispergieren der Probe mit Erreger­ antigen in einer Pufferlösung und Zusammenbringen der Pufferlösung mit einer festen Phase, an der mindestens zwei primäre Antikörper gebunden sind, von denen einer Erregerantigen und der andere menschliches Immunglobulin-A spezifisch bindet;
Waschen der festen Phase von nicht spezifisch gebun­ denen Proteinen und Zusammenbringen der festen Phase mit einem sekundären Antikörper, der spezifisch an Erreger­ antigen bindet, und Bestimmen der Menge an spezifisch gebundenem Sekundärantikörper.
2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei der zweite Primärantikör­ per sekretorisches Human-IgA bindet.
3. Verfahren nach Anspruch 2, wobei der zweite Primärantikör­ per sekretorisches Human-IgA2 bindet.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei Sekundärantikörper mit Biotin, Fluroescein, alkalische Phosphatase oder Meerrettichperoxidase konjugiert ist.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei der erste Primärantikörper und der Sekundärantikörper Helico­ bacter pylori-Antigene bindet.
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei der erste Primärantikörper eine Mischung polyklonaler Anti­ körper gegen verschiedene Helicobacter pylori-Stämme ist.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei der Sekundärantikörper eine Mischung polyklonaler Antikörper gegen verschiedene Helicobacter pylori-Stämme ist.
8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass der Erreger Camphylobacter ist.
9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass der Erreger eine massive Immunre­ aktion im menschlichen Körper hervorruft.
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