CN103620408B - 运用二维特征的侧向层析检测 - Google Patents

Abstract

本发明涉及新的采用二维特征的侧向层析装置，优选地，均一的二维检测和对照特征，以及采用侧向层析装置检测分析物的方法，以及制造所述侧向层析装置的工艺。

Description

运用二维特征的侧向层析检测

I.相关申请的交叉引用

本发明要求2011年1月18日提交的序列号为61/461,499的美国临时申请以及2012年1月4日提交的序列号为13/343,681的优先权，通过引用两者的内容全部包含于此。

II.技术领域

本发明涉及运用二维特征的新的侧向层析装置，优选均一的二维检测和对照特征，及使用所述侧向层析装置检测分析物的方法，以及制造所述侧向层析装置的过程。

III.背景技术

侧向层析检测在人类非葡萄糖快速检测市场中占首要地位，并且也在其它要求检测结果快速产生的应用领域中占优势，例如，包括兽医诊断、农业检测、生物战检测以及食物安全检测。

侧向层析检测系统（LFIA）的优势是众所周知的（参见表1）。在这些优势中，关键是它们代表了恰当的关注点和领域使用技术，其可以被迅速投入市场并且需要相对小的投资，并且被用于非常广泛的应用。

表1：侧向层析检测关于必须应用的优势

传统设计的侧向层析检测受到性能限制、最显著的低灵敏性和差的可重现性的影响。另外，标准形式的侧向层析检测在检测和对照区以线的存在或缺失的形式产生结果，其必须通过眼睛来理解。这种主观解释可以经常是困难的并且可以导致错误的结果。这些局限已经被连续使用传统的发展和生产实践、材料、标签以及目视检测系统加重。对线性特征例如表明系统中分析物的存在或缺失的连续线条的产生的依赖是多种机械因子的函数，可能抑制其它特征在相同底物上的可重现性形成。在许多实例中，需要在单一样品中检测多种反应（复用）。线性特征的使用使复用困难，使竞争检测结果的解释不直观，并且还导致了由使用者过失产生的变化性。

进一步地，经常与实验室信息系统（LIS）相连的定量和客观的阅读/记录技术以增长的速度被实现。在相同检测系统中有必要检测多于一种分析物的多路复用系统的要求也在发展中。现在的侧向层析检测系统通常不能满足这些需求。

现在的侧向层析检测系统和方法的局限性从本质上已经将它们限制在相对低的具体要求检测中应用。为了更多要求高灵敏性、定量和复用的高要求系统，以及为了许多市场范围例如军事的、消费者、环境的或兽医检测，其中要求直观的、快速的、容易解释的结果，现在的侧向层析系统是不适合的。

因此，需要克服现在技术和方法学的局限性的、较少受到理解错误的、可以产生定量结果、可重现的、可复用的以及可以用于许多市场范围的装置和方法。本发明专注于这些以及其它相关的需求。

在这里公开的本发明提供了这样的装置，并公开了包含但不局限于制造快速的可以产生代表检测结果的唯一标记的容易理解的结果的检测的方法在内的方法。所述标记可以是眼睛或阅读器可见的标准符号或者可以是能被专用阅读装置解释的加密标记。所述标记可以发展成相对于检测流动方向的任何取向。取决于检测和试剂设计，所述标记也可以表示定性结果（阳性的或阴性的）、半定量或定量结果。

侧向层析检测形式

图1显示了这种侧向层析检测的典型结构。传统设计的检测由多种材料组成，每一种为一个或多个目的服务，互相重叠，用压敏粘合剂安装在衬卡上。

所述检测装置由几个通常由不同材料的单独部分构成的区组成，其中每一个将在这里简单解释。当检测运行时，待测材料的样品（样品）被加到带的近端，加在样品垫上。在这里，样品用添加的预定试剂处理从而使它与剩下的检测兼容。处理过的样品（其可能被溶解、悬浮、乳化或任何其它的液化形式）的液相成分迁移到检测装置的下一部分，结合垫。在这里，检测试剂已被固定，一般由被动或共价连接到通常为胶体金或有色的、荧光的或顺磁的单分散胶乳粒子的信号分子或颗粒的蛋白组成。信号试剂也可以是另一种试剂，包括非粒子的（例如，可溶的、直接标记的荧光团凝胶）。这种标记已经被结合在检测的特异的生物成分之一，抗原或抗体上，取决于具体检测装置的检测形式。所述液相样品再调动干燥的结合材料，使其并入液相样品材料中，并且当两者都迁移到检测带的下一部分——反应基质时，样品中的分析物与结合剂相互作用。为了运送液体至试剂和对照，所述反应基质通常是具有亲水性的多孔膜，其上已固定了检测另一种的特异的生物成分。这些通常是蛋白，抗体或抗原，它们在膜的具体区域已被放置成带状或条状，其中它们用来捕获液相样品中的成分，分析物和结合剂，当它们迁移超过、通过或越过捕获线时。过量的液相材料（样品和试剂）持续迁移穿过所述带，超过捕获线并在毛细管或吸收板中被俘获。检测结果在反应基质上产生并表现为捕获的结合剂的存在或缺失的标记（通常为连续线条），通过眼睛或使用阅读装置读出。

实际上检测形式经常是夹心型（直接的）或竞争型的（竞争抑制），并且可以适应定性的、半定量的，或在具体的特别实例中完全定量的检测。

当检测具有多个抗原位点的大分析物时，例如人体绒毛膜促性腺激素（hCG）、登革热抗体或抗原或HIV，通常使用直接检测形式。在这个实例中，通过检测线条的存在表明阳性的结果。一些结合颗粒将不会被捕获线捕获，并且将持续流向固定抗体的第二条线，对照线。对照线通常包含物种特异的抗免疫球蛋白抗体，对结合剂上的结合抗体是特异的。

当进行具有单一抗原决定簇的不能同时结合两个抗体的小分子检测时，通常使用竞争型检测。在这种形式中，在反应基质上的检测线的缺失表示阳性结果。对照线也应该产生，独立于检测线上的结果。在图2a和2b中示意性说明了两种形式。

侧向层析系统中的液体输送和信号发展

现在的侧向层析检测装置的功能建立在沿着检测带长度从如图1所示的样品引入垫流向吸收垫的液体毛细管流的基础上。因此，通过反应基质，并通过检测和对照线的流动几何学和毛细管驱动力本质上是一维的。硝酸纤维素膜是在侧向层析检测中主要使用的反应基质。在侧向层析装置中检测和对照线通常由蛋白组成但可以是结合到反应基质的其它类型的生物标记，通常为垂直于流动方向取向的线性形式。

描述作为反应基质的硝酸纤维素的加工和使用的例子将说明这种线性形式的问题。

目的：侧向层析检测中的反应基质的目的是结合检测和对照区域的蛋白或其它捕获试剂，并维持它们的稳定性和活性超过产物的保存期。当检测运行时，所述基质必须接受来自结合垫的结合剂和样品，将它们一直流到反应区域，允许位于检测和对照线的反应发生并允许过量的液体、标记和反应物不结合而流出。

材料：绝大多数侧向层析检测系统中的材料选择历史上已是硝酸纤维素。已有几次尝试将其它材料类型引入市场，包括尼龙膜和PVDF膜，然而那些尝试只有有限的成功，似乎原因包括成本、有限的功用、关于新的化学和处理要求的教育的需求，以及由于在硝酸纤维素膜的使用中大量的现有经验导致的惯性。其它的基质在发展中，包括具有控制接触角从而允许反应物的流动以控制模式发生在基质表面的塑料材料。

硝酸纤维素，虽然非常有用，但不可能总是LFIA中理想的作为分析膜的基质。它具有使它有用的必然特征，并且至今它仍然是这样成功而广泛地被应用的唯一材料。这些特征包括相对低的成本、真毛细管流动特征、高蛋白结合能力、相对简单的操作（具有直接的铸造，或衬膜）以及多种具有可变毛细吸水速率和表面活性剂成分的可用产物。然而，所述材料也具有多种使它对于这个应用不完美的特征。这些包括组间不完美的性能再现性、保存期限问题、易燃（主要在无衬的膜中）、环境条件例如相对潮湿所致的可变特征，以及处理过程中受到破损（如果无衬）、紧缩和擦痕。

所述材料的这些问题产生的结果是，开发商和制造商在优化化学性质以克服一些固有的材料问题上，以及在开发超过产物保存期限后保证适当性能的制造过程上花了相当大量的时间和努力。仔细控制分配、浸渍和干燥的关键过程，以及注意为避免向完成的产品引入另外的变量而对膜的化学和生物处理对成功是极其重要的。

流动特征：为了担任侧向层析系统中的反应基质，材料通常是亲水的并具有连续流动的特征。硝酸纤维素作为基质是疏水的，在膜生产过程中通过加入再湿润试剂制成亲水的。这些再湿润试剂是表面活性剂，并且表面活性剂的数量和类型以及表面活性剂加入方法，不同的制造商不同，并且同一制造商其不同的品牌也不同。膜当中的表面活性剂的数量和类型可以在最初和随后影响检测的性能。不是每种蛋白都会适合每种表面活性剂。这是在开发过程中需要筛选多种膜类型的一个原因。硝酸纤维素膜的流动特征随时间而改变，主要是由于在存储过程中膜的失水。可以把硝酸纤维素膜想象成海绵，海绵的细孔被水保持开放。如果水被去除，那么细孔坍塌，破坏膜通过它毛细吸收液体的能力。这导致了流速随时间的改变和不一致。因此，基于硝酸纤维素膜的检测可以改变它们随时间的性能特征，因为速度直接影响检测的灵敏性，并且延长的运行时间可以导致假阳性问题。这是侧向层析检测中可变性的主要促成因素。

侧向层析系统的恰当执行的关键是要求系统只在需要的位置，即检测检测和对照线，结合反应物。膜的蛋白结合能力，它与蛋白的相互作用，以及蛋白结合过程的动力学是决定人们怎样能够将指定的蛋白组加在膜上及产生的诊断检测有多灵敏的决定因素。蛋白通过静电键、氢键和疏水力作用的组合结合在硝酸纤维素上。在侧向层析或流过整个检测的层析中，免疫活性蛋白持续地和可再现地固定在检测和对照线上是产生灵敏的、可再现的结果的关键要素之一。

膜处理：硝酸纤维素在整合进入最后装置之前必须经过几个过程，那些通常是使用定量分配器进行的检测和对照线蛋白的沉淀、使用送风器在高温下的干燥，以及用于封闭的浸泡过程。为了放置检测和对照线蛋白，使用接触或非接触分配系统在膜上形成蛋白带，并且此后通常被封闭从而控制和稳定流速以及水合特征，并防止非特异结合。用于检测和对照线的分配方法必须尽可能是定量的，并且不应该受到由材料水合或吸收特征变化而引起的变化。非接触分配方法提供了最好的定量分配蛋白在硝酸纤维素上的解决方案。封闭硝酸纤维素膜的目的是防止蛋白和标记的结合剂结合到膜上除了可以特异结合的检测和对照线之外的其它区域。封闭还提供其它功能，包括膜的水合作用的维持、毛细管吸收速率的改进以及检测和对照线蛋白的稳定。封闭通常是通过膜在含有蛋白、表面活性剂及聚合物的溶液中浸泡来完成，并且是相对不受控制的过程。封闭方法必须得到仔细优化和控制从而产生超过产物总保存期的最后产物中的最佳性能。随后，干燥通常是通过为去除表面液体的封闭以及高温下的送风的组合来进行。此外，这个干燥过程必须得到仔细优化和控制，从而将最终产物的变化减至最低程度。

所述过程产生一条或多条穿过反应基质的宽度的捕获试剂的结合线。当检测运行时，结合蛋白和随后与流动样品/结合剂反应时夹心型的形成联合增加了检测和对照线区域内的流动阻力。线内的表面活性剂由于分配过程已经从那个区域一定程度地被驱走，导致穿过膜的线条比之前和之后的所述区域更加疏水，就液体流过基质而言，这种情况也会增加流动阻力。

因此，在标准的侧向层析结构中，检测和对照装置干扰了系统内的液体和分析物的层析。使用贯穿整个装置宽度的检测和对照线的主要原因之一是为了确保横穿装置宽度的干扰是均衡的并且纵向的层析仍然是均衡的和有效的一维的。这阻碍了其它更优选的检测解释特征的产生，例如字母数字符号或定量的标记。

现在的侧向层析装置和它们相关的制造过程在它们的使用、精确性和再现性上强加了多种限制。

1、复用是困难的。

a.关于为了产生能够在单一装置中检测多于一种分析物的检测的需求诊断存在增长的要求。在标准的结构中，这意味着分配多条垂直于层析方向的以1毫米或大于1毫米的距离隔开的线条。这种类型的复用试验中的常见问题是“线条弥散”，其中在一条线上产生的信号可以“弥散”进下一条线中，其中结合剂是物理上受限的，导致装置中背景的产生，由此降低了检测的灵敏性，并可能导致假阳性。

b.系统中每个检测的动力学不同于其余的每个检测。侧向层析检测是高度时间敏感检测。样品和结合剂在结合剂或样品垫中一混合反应就开始，并在通过装置到检测和对照线的迁移过程中持续。在检测线的反应迅速发生，通常短于30秒。反应物通过装置的流速对检测的进行可以是极其重要的。通过通常为硝酸纤维素膜的分析膜的流速在起点远处以非线性方式减小。因此，多线条检测中第一反应到达第一捕获线的时间，以及所述反应到达最后线条的时间，可以显著不同。这暗示了复用形式中产生定量检测的能力。

2、抗体选择必须致力于具有非常高的亲和性和“结合速率”（K_on）的抗体。这是由于在检测线的反应必须在仅几秒内发生。这使抗体选择困难，并意味着，与更多人类环境改造学的方法例如可以筛选具有不同结合特征的抗体的ELISA相比，必须使用费力的筛选方法例如点印迹或侧向层析形式。所述高亲和性使它不可能在流动方向均匀地发展大直径特征（包括可以在流动方向表现出强度层次的线条）。适当结合进大特征的小特征（“像素”）的使用克服了这个问题。

3、仅产生单一形式的结果（水平线）。流体动力学和检测条中结合的结合剂使侧向层析检测中字母、符号和除了垂直于流动方向外的任何方向的线条的产生困难。在侧向层析系统中产生可选形状的困难的两个简单的例子在图3和4（圆点和+）中说明。

a.圆点：如果结合剂在膜上呈小圆点，那么试剂流动和结合剂的结合特征将通常导致图3所示的三种结果之一：（a）半月形的产生，表明结合剂结合在圆点的前缘而圆点形状的剩余部分没有填满。这表明了在前缘的高亲和性结合阻止进一步流体通过圆点，而试剂剩余部分则找到圆点周围具有最小阻力的路径；（b）填满但通常易变的圆点，表明对于侧向层析形式不是最佳的低亲和性结合试剂；以及（c）无结合，表明结合试剂的不特异性或阴性样品。

b.加号/减号：这种形式的典型实施例是，如图4所示的对照线会以减号显示并且组合的检测和对照将以加号显示的实施例。图4中显示的是具有平行于1维流体分配的检测线的加号的实际发展。在这种情况下，靠近流体引入的检测线的末端表现出沿结合剂的最高水平扩展，而另一端则表现出仅仅沿着检测线边缘的扩展。在这种情况下，由于高内部流动阻力，结合剂不流到线条的内部。如果实验中检测和对照线位置互换，可以预料相同的结果。

4、线条的解释是困难的，尤其是在依靠使用者的眼睛来解释的系统中。此外，侧向层析检测通常约2-8mm宽。典型的分析膜是硝酸纤维素膜，是在批次内或批次间都不一致的多相材料。因此，常见到导致横穿装置宽度的不均一线条的产生的流体效应。这种线条扩展中的不均一性也可以由过程相关因素引起。这种凹凸不平的线条扩展导致进一步的解释问题，并且可能特别是对于阅读系统是困难的。

一维流体的主要效果示意性显示在图5（a）、（b）和（c）中，其中用不同体积的分配滴剂在相对于线的不同位置将分配蛋白斑点形式的流体阻力置于检测和对照线之前的流动路径中。检测线的扩展按照蛋白斑点的放置直接受到干扰。横向扩散发生在系统中，但只有当两个特征间的距离足够远时才可以引起流体努力达到斑点的特征的均衡扩展。所需距离取决于斑点的直径和膜的孔径大小，并且通常是使在检测的工作维度中不可能产生可解释的字母数字的或其它符号的距离。

IV.发明内容

一方面，本发明提供用于检测液体样品中分析物的检测装置，所述装置包括在基质上的多个试剂点，其中至少两个所述试剂点不重叠并且相互之间充分地相隔以便当所述液体样品沿着所述基质横向层析时，所述液体样品流向、通过和/或围绕所述两个试剂点之一的流动基本上不会影响流向、通过和/或围绕所述另一种试剂点的流动，所述两个试剂点中的每一种既不是横穿所述基质整个宽度的垂直于所述液体样品流方向的试剂线也不是完全环状的试剂线，并且在液体样品沿着所述检测装置横向层析并通过所述至少两个试剂点后，所述至少两个试剂点形成预定的图形来表明所述液体样品中所述分析物的存在、缺失和/或数量。

另一方面，本发明提供使用上述检测装置检测分析物的方法。在一个典型的实施例中，本发明提供了用于检测液体样品中分析物的方法，所述方法包括a）用上述检测装置接触液体样品，其中所述液体样品加在所述至少两个试剂点上游的检测装置的位置上；b）运送分析物，如果存在于液体样品中的话，运送到至少两个试剂点；以及c)评估在所述至少两个试剂点产生的信号的存在、缺失、数量和/或图形来确定液体样品中分析物的存在、缺失和/或数量。所述在试剂点的信号可以通过任何合适的反应产生，例如包含分析物、位于试剂点的试剂、加入液体样品的试剂和/或使用前在检测装置上变干并被液体样品或其它液体运送至试剂点的其它试剂在内的化学的、生物化学的、电气化学的，和/或结合的反应。

在另一个典型的实施例中，所述试剂点处的信号可以通过包含分析物和位于试剂点的试剂，以及加入液体样品中的或使用前在检测装置上变干并被液体样品或其它液体运送至试剂点的标记的试剂的结合反应产生。例如，所述方法包括a）用上述检测装置接触液体样品，其中所述液体样品加在所述至少两个试剂点上游的检测装置的位置上；b）运送分析物，如果存在于液体样品中的话，以及标记的试剂到至少两个试剂点；以及c)评估在所述至少两个试剂点产生的信号的存在、缺失、数量和/或图形来确定液体样品中分析物的存在、缺失和/或数量。

还是在另一方面，本发明提供制造用于检测液体样品中分析物的检测装置的工序，所述工序包括在基质上产生多个试剂点，使检测装置包括至少两个所述试剂点，其中至少两个所述试剂不重叠并且相互之间充分地相隔以便当所述液体样品沿着所述基质横向层析时，所述液体样品流向、通过和/或围绕所述两个试剂点之一的流动基本上不会影响流向、通过和/或围绕所述另一种试剂点的流动，其中所述两个试剂点中的每一种既不是横穿所述基质整个宽度的垂直于所述液体样品流方向的试剂线也不是完全环状的试剂线，并且在液体样品沿着所述检测装置横向层析并通过所述至少两个试剂点后，所述至少两个试剂点形成预定的图形来表明所述液体样品中所述分析物的存在、缺失和/或数量。

本检测装置的原理和方法可以用于，或可以使其适合用于本领域中的侧向流动检测装置和试验。例如，本检测装置的原理和方法可以用于，或可以使其适合用于美国专利号3,641,235、3,959,078、3,966,897、4,094,647、4,168,146、4,299,916、4,347,312、4,366,241、4,391,904、4,425,438、4,517,288、4,960,691、5,141,875、4,857,453、5,073,484、4,695,554、4,703,017、4,743,560、5,075,078、5,591,645、5,656,448、RE38,430E、5,602,040、6,017,767、6,319,676、6,352,862、6,485,982、5,120,643、4,956,302、RE39,664E、5,252,496、5,514,602、7,238,538B2、7,175,992B2、6,770,487B2、5,712,170、5,275,785、5,504,013、6,156,271、6,187,269、6,399,398、7,317,532，EP0,149,168A1、EP0,323,605A1、EP0,250,137A2，GB1,526,708以及WO99/40438中公开的和/或权利要求的侧向层析检测装置和检测。

V.附图说明

本专利或申请文件包含至少一副彩色附图。具有彩色附图的本专利或专利申请公布的副本将由专利局在收到请求和必要费用支付的时候提供。

图1说明侧向层析检测形式的示意图。

F图2（a）说明夹心型检测扩展的示意图。图2（b）说明竞争型检测扩展的示意图。

图3（a）说明不具有亲和性捕获试剂的斑点扩展的示意图。图3（b）说明具有低亲和性捕获试剂的斑点扩展的示意图。图3（c）说明具有靶标高亲和性捕获试剂的斑点扩展的示意图。

图4说明使用标准分配方法，捕获线在流体方向的“加号”符号扩展的示意图。当使用单一连续试剂线时，检测（捕获）线的加号结构的扩展平行于流体方向。由于通过结合试剂区域的流体的干扰，所述线的扩展是不完全的。

图5说明侧向层析系统中流体的一维特征以及通过在流体路径中放置阻力所产生的流体干扰效应的示意图。在结合试剂线的前方布置结合试剂装置显示侧向层析系统中流体的线性特征。与封闭装置的结合干扰了液体流动，强迫液体围绕封闭物并阻碍了封闭之后在结合试剂线中结合信号的产生。一旦所述装置被置于足够远，一定距离后就会发生允许一些扩展和最后完整扩展的垂直于流体方向的扩散。足够发生横向扩散所需的距离取决于封闭装置的大小和多孔材料的孔径大小。

图6说明一维定量试验的示意图。通过安置合适大小和相互距离的装置，试剂的横向层析不会在装置间收到干扰，因此所有的装置可以均匀地暴露于迁移的分析物中。这允许了分析物的逐渐结合以及当它移动通过结合区域时分析物浓度的减小。因此，进一步地沿着流体路径的结合信号强度的变化暗示了分析物浓度。

图7说明2维定量排列的示意图。结合试剂在流体路径中被沉淀为二维像素。在流体方向的所有像素中，结合试剂的浓度相同，但在垂直于流体方向的每一排中的浓度变化。如图6所示，所述系统以相同的方式进行定量，然而，二维结合试剂的滴定允许在检测中产生更大的动力学范围。

图8说明多元试验（4种分析物）的示意图。在每个“通道”中不同的结合试剂允许分析物检测的复用。

图9说明了典型的字母数字像素阵列。阵列可以打印成任何方向，允许产生字母数字结果。

图10A和10B说明了编程的和实际的典型信号读出图像。图10A说明编程的“X”符号。图10B说明从实际检测中获得的“X”符号。

图11A和11B说明了编程的和实际的典型信号读出图像。图11A说明了编程的“+”符号。图11B说明了从实际检测中获得的“+”符号。

图12A和12B说明了编程的和实际的另一个典型信号读出图像。图12A说明了编程的“+”符号。图12B说明了从实际检测中获得的“+”符号。

图13A和13B说明了编程的和实际的典型信号读出图像。图13A说明了编程的“X”符号。图13B说明了从实际检测中获得的“X”符号。

图14A和14B说明了编程的和实际的典型信号读出图像。图14A说明编程的“TC”符号。图14B说明从实际检测中获得的“TC”符号。

图15A和15B说明了编程的和实际的典型信号读出图像。图15A说明另一个编程的“X”（盒内）符号。图15B说明从实际检测中获得的“X”（盒内）符号。

图16A和16B说明了编程的和实际的典型信号读出图像。图16A说明另一个编程的“YES”符号和“NO”符号。图15B说明从实际检测中获得的“YES”和“NO”符号。

图17说明了从为改善信号清晰度的实际检测中获得的多种符号。

图18说明了从使用荧光标签（铕）的实际检测中获得的“X”符号。

图19A-19E说明了为侧向层析检测使用“像素”概念的信号扩展的优化。

图20A-20D说明了“像素”概念在多元侧向层析检测中的应用。

图21A-21D说明了使用更小分配体积的多种斑点图形的结构。

VI.本发明的详细说明

A．定义

除非另有规定，本文所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所述领域中普通技术人员之一通常所理解的相同的意思。本文所引用的所有专利、专利申请（公开的或未公开的）以及其它出版物通过引用全文包含于此。如果在这个部分解释的定义与通过引用包含于此的专利、申请、公开的申请以及其它出版物相反或别的不一致，那么在这个部分解释的定义胜过通过引用包含于此的定义。

如这里所使用的，“a”或“an”意思是“至少一个”或“一个或多个”。

如这里所使用的，“所述线基本平行于液体样品流动方向”意思是所述线和液体样品流动方向之间的角度至少小于45度或大于135度。在一些具体的实施例中，所述线和液体样品流动方向之间的角度大约是40、35、30、25、20、15、10、5、4、3、2或1度，或者所述线完全平行于液体样品流动方向。在其它的具体实施例中，所述线和液体样品流动方向之间的角度大约是140、145、150、155、160、165、170、175、176、177、178或179度，或者所述线完全平行于液体样品流动方向。

如这里所使用的，“所述线基本垂直于液体样品流动方向”意思是所述线和液体样品流动方向之间的角度至少大于45度或小于135度。在一些具体的实施例中，所述线和液体样品流动方向之间的角度大约是50、55、60、65、70、75、80、85、86、87、88或89度，或者所述线完全垂直于液体样品流动方向。在其它的具体实施例中，所述线和液体样品流动方向之间的角度大约是130、125、120、115、110、105、100、95、94、93、92或91度，或者所述线完全垂直于液体样品流动方向。

如这里所使用的，“试剂点具有基本相同的大小或直径”意思是最大斑点和最小斑点之间大小或直径的差额不多于一倍或小于试剂点的大小或直径的平均值或中间值的50%。在一些具体的实施例中，最大斑点和最小斑点之间大小或直径的差额在试剂点的大小或直径的平均值或中间值的45%、40%、30%、20%、10%、5%或1%的范围内。在其它的具体的实施例中，试剂点具有相同的大小或直径。

如这里所使用的，“试剂点之间的距离基本上是相同的”意思是试剂点，经常是相邻的试剂点之间或之内的距离，在试剂点或相邻试剂点之间的平均或中间距离的50%的变化范围内。在一些具体的实施例中，试剂点或相邻的试剂点之间或之内的距离在试剂点或相邻的试剂点之间或之内的平均或中间距离的45%、40%、30%、20%、10%、5%或1%的变化范围内。在其它的具体实施例中，试剂点之间或之内的距离是相等的。这样的间隔或距离可以通过任何合适的方法测量。在一些具体的实施例中，试剂点之间或之内的间隔或距离测量为试剂点或相邻试剂点的边缘之间或之内的间隔或距离。在其它的具体实施例中，试剂点之间或之内的间隔或距离测量为试剂点或相邻试剂点的中心或有效中心之间或之内的间隔或距离。

如这里所使用的，“结合试剂”指的是任何以期望的亲和性和/或特异性结合靶标或分析物的物质。结合试剂的非局限性例子包括细胞、细胞的细胞器、病毒、颗粒、微粒子、分子，或其聚集体或复合体，或分子的聚集体或复合体。典型的结合试剂可以是氨基酸、肽、蛋白，例如，抗体或受体、核苷、核苷酸、寡核苷酸、核酸，例如DNA或RNA、维生素、单糖、寡糖、碳水化合物、脂质、适体及其复合体。

如这里所使用的，“抗体”不仅包括完整的多克隆或单克隆抗体，还包括其片段（例如Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fv）、单链（ScFv）、双特异抗体、由抗体片段形成的复合特异性抗体、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白，以及任何其它修饰的包含所需特异性抗原识别位点的免疫球蛋白分子结构。抗体包括任何种类的抗体，例如IgG、IgA或IgM（或其亚类），并且所述抗体不需要是任何特别的种类。

如这里所使用的，“单克隆抗体”指的是从基本同源的抗体种群中获得的抗体，即除了少量存在的可能自发产生的突变外，包含所述种群的抗体是相同的。如这里所使用的，“单克隆抗体”进一步指的是单克隆抗体的功能片段。

如这里所使用的，术语“特异地结合”指的是结合试剂例如抗体的特异性，因此它优选结合在限定的分析物或目标上。在其它潜在目标存在的情况下，结合试剂或抗体对特别分析物或目标的识别是这种结合的一个特征。在一些实施例中，特异性结合分析物的结合试剂避免结合待测样品中其它干扰部分或组成部分。

这里使用的术语“避免结合”指的是特别结合试剂的特异性，例如，抗体或抗体片段。避免结合在特别的组成部分的结合试剂、抗体或抗体片段通常包含特异性，因此，大的百分比的特别的组成部分将不会被这样的结合试剂、抗体或抗体片段结合。所述百分比通常处于利用检测特异目标的结合试剂或抗体的检测中与干扰组成部分交叉反应的可接受的百分比的范围内。目前公开的结合试剂、抗体或抗体片段经常避免结合约90%以上的干扰组成部分，尽管明确考虑和首选更高的百分比。例如，目前公开的结合试剂、抗体或抗体片段避免结合约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%，以及约99%或更多的干扰组成部分。偶尔，目前公开的结合试剂、抗体或抗体片段避免结合高于约70%，或高于约75%，或高于约80%，或高于约85%的干扰组成部分。

如这里所使用的，“哺乳动物”指的是任何哺乳类物种。这里使用的术语“哺乳动物”经常指的是人、人类对象或人类患者。

如这里所使用的，术语“对象”不局限于具体物种或样品类型。例如，术语“对象”可以指患者，并且经常是人类患者。然而，这个术语不局限于人类，因此包括多种哺乳动物物种。

如这里所使用的，术语“样品”指的是可能包含分析物检测需要的分析物的任何物质。样品可以是生物样品，例如生物液体或生物组织。生物液体的例子包括尿、血液、细胞质、血清、唾液、精液、粪便、痰、脑脊髓液、泪液、粘液、羊水或类似物。生物组织是细胞的聚集体，通常是与它们的细胞间质一起形成人类、动物、植物、细菌、真菌或病毒结构的结构材料之一的特定种类的细胞的聚集体，包括结缔、上皮、肌肉和神经组织。生物组织的例子还包括器官、肿瘤、淋巴结、动脉和单个细胞。

如这里所使用的，核酸杂交反应的“严格”容易被本领域普通技术人员之一确定，并且通常是取决于探针长度、洗涤温度和盐浓度的经验计算。一般而言，更长的探针要求更高的特异退火温度，而更短的探针需要更低的温度。当互补链存在于低于它们解链温度的环境中时，杂交通常取决于变性核酸序列的再退火的能力。探针和杂交序列之间所需的同源性级别越高，可以使用的相对温度也越高。因此得出结论，越高的相对温度将使反应条件更加严格，而越低的相对温度则相反。更多关于杂交反应严格性的描述和解释，参见最新分子生物学指南（Ausubeletal.eds.,WileyIntersciencePublishers,1995）；分子克隆：实验室手册（J.Sambrook,E.Fritsch,T.Maniatiseds.,ColdSpringHarborLaboratoryPress,2ded.1989）；Woodetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:1585-1588(1985)。

这里使用的术语“分离的”指的是从其原始环境中除去的材料，并且改变了其天然状态。例如，分离的多肽可以与载体结合，并且还是“分离的”，因为所述多肽不在其原始环境中。

如这里所使用的，“测试物（或候选化合物）”指的是化学上定义的化合物（例如，有机分子、无机分子、有机/无机分子、蛋白、肽、核酸、寡核苷酸、脂类、多糖、糖类，或这些分子的混合物如糖蛋白等）或化合物的混合物（例如，测试化合物库、天然提取物或培养上清液等），其对目标的作用视这里公开的和/或要求的方法而定。

如这里所使用的，高通量筛选（HTS）指的是测试大量样品的工序，例如用于确定“命中”（参见，例如Broach,etal.,Highthroughputscreeningfordrugdiscovery,Nature,384:14-16(1996);Janzen,etal.,Highthroughputscreeningasadiscoverytoolinthepharmaceuticalindustry,LabRoboticsAutomation:8261-265(1996);Fernandes,P.B.,Letterfromthesocietypresident,J.Biomol.Screening,2:1(1997);Burbaum,etal.,Newtechnologiesforhigh-throughputscreening,Curr.Opin.Chem.Biol.,1:72-78(1997)）的多种对抗疾病靶标的化学结构的样品。HTS进行样品准备、试验程序及后续大量数据加工的操作是高度自动化和计算机化的。

如这里所使用的，“植物”指的是典型地产生胚胎、包含叶绿体、具有纤维素细胞壁及缺乏运动能力的任何植物界各种光合作用的真核多细胞生物。

如这里所使用的，“动物”指的是动物界多细胞生物，具有运动能力、非光合作用的新陈代谢、明显的应激反应、有限的生长和固定的身体结构的特征。动物的非局限性例子包括鸟类例如鸡、脊椎动物例如鱼和哺乳动物如小鼠、大鼠、兔、猫、狗、猪、奶牛、公牛、绵羊、山羊、马、猴子和其它非人类灵长类动物。

如这里所使用的，“细菌”指的是具有未分区的环状DNA及约70S的核糖体的小原核生物（大约1微米的线性尺寸）。细菌蛋白合成不同于真核生物的蛋白合成。许多抗细菌的抗菌素干扰细菌蛋白合成而不影响感染的寄主。

如这里所使用的，“真细菌”指的是除了古细菌外细菌的重要分支。大部分革兰式阳性细菌、蓝细菌、支原体、肠杆菌、假单胞菌及叶绿体是真细菌。真细菌的细胞质膜包含酯联的脂类；在细胞壁中（如果存在）含有肽聚糖；并且在真细菌中没有发现内含子。

如这里所使用的，“古细菌”指的是除了真细菌外细菌的重要分支。古细菌有三个主要类别：极端嗜盐菌、产甲烷菌和硫依赖型极端嗜热菌。古细菌在核糖体结构、内含子的占有（在一些情况下）以及其它包含膜成分在内的特征上不同于真细菌。

如这里所使用的，“病毒”指的是由DNA或RNA和蛋白包被组成的生物的专性胞内寄生物，但非细胞特征。病毒直径在约20nm至约30nm的范围内。I类病毒（巴尔的摩分类）具有双链DNA作为它们的基因组；II类病毒具有单链DNA作为它们的基因组；III类病毒具有双链RNA作为它们的基因组；IV类病毒具有正义单链RNA作为它们的基因组，所述基因组本身起mRNA的作用；V类病毒具有用作mRNA合成模板的反义单链RNA作为它们的基因组；以及VI类病毒具有正义单链RNA基因组，但在复制和mRNA合成过程中都具有DNA中间体。多数病毒通过它们在植物、动物和原核生物中引起的疾病得到识别。原核生物的病毒叫做噬菌体。

如这里所使用的，“真菌”指的是不对称聚集生长，无根、茎或叶，并且缺乏叶绿素或其它能进行光合作用的色素的真核生物的分支。每种生物（叶状体）从单细胞的到细丝状的，并具有被含有葡聚糖或壳质或两者的细胞壁包围的分支躯体结构（菌丝），且含有真的细胞核。

B．运用二维特征的侧向层析装置

一方面，本发明提供用于检测液体样品中分析物的检测装置，所述装置包括在基质上的多个试剂点，其中至少两个所述试剂点不重叠并且相互之间充分地相隔以便当所述液体样品沿着所述基质横向流动时，所述液体样品流向、通过和/或围绕所述两个试剂点之一的流动基本上不会影响所述液体样品流向、通过和/或围绕所述另一种试剂点的流动，所述两个试剂点中的每一种既不是横穿所述基质整个宽度的垂直于所述液体样品流方向的试剂线也不是完全环状的试剂线，并且在液体样品沿着所述检测装置横向流动并通过所述至少两个试剂点后，所述至少两个试剂点形成预定的图形来表明所述液体样品中所述分析物的存在、缺失和/或数量。

许多变量可以考虑从而使检测装置确保所述试剂点不重叠并且相互之间充分地相隔以便所述液体样品流向、通过和/或围绕一种试剂点或一组试剂点的流动基本上不会影响所述液体样品流向、通过和/或围绕另一种试剂点或其它组试剂点的流动。并且同时，所述检测装置应该包含足够数量的能够用于产生信号读出从而表明所述液体样品中所述分析物的存在、缺失和/或数量的试剂点。在制造检测装置的过程中可以考虑和/或调整的典型变量包括试剂点的数量、试剂点的大小和/或形状，例如，绝对大小或相对于基质大小的大小、位于试剂点的试剂类型和数量、检测装置上部分或全部试剂点之间或之内的间距，例如，间距的绝对大小或相对于基质大小的间距大小和/或基质上的试剂点数量、试剂点相对于液体样品流动方向的方向或位置、试剂点中的大小和/或形状的均匀性或变化以及基质的性质，例如基质的材料和/或多孔性，和/或产生试剂点的溶液的性质或组成。为了使检测装置满足预期的测试性能，例如，满足预期的或所需的试验灵敏性和/或特异性，这些变量中的一些或全部可以被测试、调整或确定。

在一些具体的实施例中，可以确定试剂点重叠并且相互之间不充分地相隔而导致所述液体样品流向、通过和/或围绕一种试剂点或一组试剂点的流动阻止或阻碍了所述液体样品流向、通过和/或围绕另一种试剂点或其它组试剂点的流动。这些变量中的一些或全部可以随后被调整以使液体样品流阻挡效应被降低至少10%，并且优选降低至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。在其它具体的实施例中，如果提供特别的结构，那么可以确定试剂样品流向、通过和/或围绕另一种试剂点或其它组试剂点的流动。这些变量中的一些或全部可以随后被调整以使液体样品流向、通过和/或围绕另一种试剂点或其它组试剂点的流动被提高至少10%，并且优选提高至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。在其它的实施例中，这些变量中的一些或全部可以随后被调整以使液体样品流向、通过和/或围绕另一种试剂点或其它组试剂点的流动被提高1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍，或更多。

检测装置可以包含任何合适的数量的试剂点。在一个例子中，检测装置包含两个试剂点。在另一个例子中，检测装置包含多于两个的试剂点，例如至少3、4、5、6、7、8、9、10、50、100、500、1,000、5,000、10,000种或更多的试剂点。

检测装置中任何合适的数量、部分或全部试剂点可以相互之间充分地相隔。例如，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点不重叠并且相互之间充分地相隔以便当液体样品沿着基质横向流动时，所述液体样品流向、通过和/或围绕一种试剂点的流动基本上不会影响所述液体样品流向、通过和/或围绕其它试剂点的流动。

在试剂点处形成的预定图形可以用任何形式、形状和/或图形。例如，预定图形可以是线条、多线条、符号、几何形状和字母数字形状、规则形状，或不规则形状，或其组合。典型的规则形状可以是线条、圆形、杆状、正方形、三角形和矩形。典型的字母数字形状可以是字母、单词、数字或其组合。

当预定图形是线条或多线条的形式时，所述线条可以是相对于液体样品流动方向的任何合适的取向或位置。在一个例子中，线条基本上平行于液体样品流动方向。在另一个例子中，线条基本上垂直于液体样品流动方向。仍在另一个例子中，预定图形是多线条的形式。所述多线条可以包含至少基本上平行于液体样品流动方向的线条和至少基本上垂直于液体样品流动方向的线条。在一些实施例中，至少线条的四分之一、三分之一、二分之一基本上平行于液体样品流动方向。在其它的实施例中，至少线条的四分之一、三分之一、二分之一基本上垂直于液体样品流动方向。

检测装置可以用于检测液体样品中单一分析物或多种分析物。在一个例子中，检测装置中的多个试剂点包含不同的试剂并且检测装置用于检测液体样品中多种分析物。在另一个例子中，检测装置中的多个试剂点包含相同的试剂并且检测装置用于检测液体样品中单一分析物的数量。

检测装置中的试剂点可以包含任何合适的试剂量。在一个例子中，多个试剂点包含等量的试剂。在另一个例子中，多个试剂点包含不同数量的试剂。

检测装置中的试剂点可以具有任何合适的大小。在一个例子中，至少一种试剂点具有大约0.1-1um、1-10um、10-50um、51-100um、101-200um、201-300um、301-400um、401-500um和501-1000um的直径。在另一个例子中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点具有大约0.1-1um、1-10um、10-50um、51-100um、101-200um、201-300um、301-400um、401-500um或501-1000um的直径。仍在另一个例子中，至少一种试剂点具有通过膜的宽度和长度计算得到的基质的长度、宽度或表面积的大约10%、5%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%、0.001%的直径或表面积或更小的直径或表面积。仍在另一个例子中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点具有基质的长度、宽度或表面的大约10%、5%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%、0.001%的直径或表面积或更小的直径或表面积。

任何合适的液滴体积可以用于制造具有合适或需要的大小的斑点。在典型的实施例中，用于在流体膜上产生斑点大小范围的液滴体积的范围可以是在大约30-200pL、201-500pL、501pL-1.001nL、1.001nLto5.0nL、5.1-25nL、21.1-100nL或100.1-500nL的范围内。下面的表1显示的是位于上述液滴范围内的多种液滴大小的球形或半球形直径。

表1

膜上试剂液滴的实际扩展的斑点大小可能更大，例如，大约比半球形液体直径大10-25%。具有上述范围的不同液滴体积的球形和半球形大小在上面表1中显示。

“直径”的含义经常视斑点的形状而定。例如，如果斑点是圆形，那么圆形的直径是任何经过圆心并且端点在圆周上的直线段。直径的长度也称为直径。对于平面中的凸形，直径被定义为可以在与其边缘相切的两条相对平行线之间形成的最大距离。“直径”的使用不限制斑点形状是圆形或其它规则形状。在一些具体的实施例中，当斑点具有不规则形状时，“直径”可以计算成表明斑点的长度或宽度的参数，例如，计算成斑点上两点之间的最大距离。

检测装置中的试剂点可以具有相同的或不同的大小或直径。在一个例子中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点具有基本相同的大小或直径。在另一个例子中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点具有基本不同的大小或直径。

检测装置中的试剂点可以具有任何合适的形状，例如，任何合适的规则的或不规则的形状。在一个例子中，至少一种试剂点具有线形、圆形、杆形、正方形、三角形、矩形或不规则形状的形状。在另一个例子中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点具有线形、圆形、杆形、正方形、三角形、矩形或不规则形状的形状。检测装置中的试剂点可以具有相同的或不同的形状。在一个例子中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点具有相同的形状。在另一个例子中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点具有不同的形状。

试剂点可以具有任何合适的斑点之间或之内的间隔或距离。在一个例子中，试剂点之间或之内的距离是大约1-10um、10-50um、51-100um、101-200um、201-300um、301-400、401-500或501-600um。试剂点之间或之内的间隔或距离可以相同或不同。在一个例子中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点之间的间隔或距离基本上是相同的。在另一个例子中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点之间的间隔或距离是不同的。这样的间隔或距离可以用任何合适的方法测量。在一些具体的实施例中，试剂点之间或之内的间隔或距离被测量为试剂点或相邻试剂点的边缘之间或之内的间隔或距离，例如，限定试剂的低阻力流动路径的斑点边缘之间或之内的距离。在其它具体的实施例中，试剂点之间或之内的间隔或距离被测量为试剂点或相邻试剂点的中心或有效中心之间或之内的间隔或距离。

试剂点可以位于基质的任何合适的地方或面上。在一个例子中，检测装置包含单层的多种试剂点。在另一个例子中，检测装置包含多层，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多层的多种试剂点。仍在另一个例子中，检测装置包含至少在基质一面的多种试剂点层。还在另一个例子中，检测装置包含至少在基质两面的多种试剂点层。

试剂点处的信号可以通过任何合适的反应产生，例如包含分析物、位于试剂点的试剂、加入液体样品和/或其它液体的试剂，和/或使用前在检测装置上变干并被液体样品或其它液体运送至试剂点的其它试剂在内的化学的、生物化学的、电气化学的，和/或结合的反应。

在一些实施例中，试剂点处的信号在包含分析物、位于试剂点的试剂、加入液体样品和/或其它液体的试剂，和/或使用前在检测装置上变干并被液体样品或其它液体运送至试剂点的其它试剂在内的结合反应的基础上产生。在一个例子中，至少一种试剂点包含能够与分析物或另一种能够结合分析物的结合试剂相结合的试剂。所述试剂优选能够特异地与分析物或另一种能够结合分析物的结合试剂相结合。所述试剂还优选避免结合检测样品中的干扰部分或组成部分。在另一个例子中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点包含能够与分析物或另一种能够结合分析物的结合试剂相结合的试剂。所述试剂优选能够特异地与分析物或另一种能够结合分析物的结合试剂相结合。

位于试剂点处的试剂可以是任何合适的物质。例如，所述试剂可以是无机分子、有机分子或其复合体。典型的无机分子可以是离子，例如钠、钾、镁、钙、氯、铁、铜、锌、锰、钴、碘、钼、钒、镍、铬、氟、硅、锡、硼或砷离子。典型的有机分子可以是氨基酸、肽、蛋白例如抗体或受体、核苷、核苷酸、寡核苷酸、核酸例如DNA或RNA、维生素、单糖、寡糖、碳水化合物、脂质及其复合体。

典型的氨基酸可以是D-或L-氨基酸。典型的氨基酸也可以是天然产生的肽和蛋白的任何组成部分，包括Ala(A)、Arg(R)、Asn(N)、Asp(D)、Cys(C)、Gln(Q)、Glu(E)、Gly(G)、His(H)、Ile(I)、Leu(L)、Lys(K)、Met(M)、Phe(F)、Pro(P)、Ser(S)、Thr(T)、Trp(W)、Tyr(Y)和Val(V)。

任何合适的蛋白或肽可以作为检测装置上的试剂使用。例如，可以使用酶、转运蛋白例如离子通道和泵、营养或贮存蛋白、收缩或能动蛋白例如肌动蛋白和肌球蛋白、结构蛋白、防御蛋白或调节蛋白例如抗体、激素和生长因子。也可以使用蛋白或肽抗原。

任何合适的核酸，包括单链、双链和三链的核酸，可以作为检测装置上的试剂使用。这类核酸的例子包括DNA，例如A-、B-或Z-形式的DNA，以及RNA，例如mRNA，tRNA和rRNA。

任何合适的核苷可以作为检测装置上的试剂使用。这类核苷的例子包括腺苷、鸟苷、胞苷、胸苷和尿苷。任何核苷酸可以作为检测装置上的试剂使用。这类核苷酸的例子包括AMP、GMP、CMP、UMP、ADP、GDP、CDP、UDP、ATP、GTP、CTP、UTP、dAMP、dGMP、dCMP、dTMP、dADP、dGDP、dCDP、dTDP、dATP、dGTP、dCTP和dTTP。

任何合适的维生素可以作为检测装置上的试剂使用。例如，可以使用水溶维生素例如维生素B1、维生素B2、烟酸、泛酸、维生素B6、生物素、叶酸、维生素B12和抗坏血酸维生素C。类似地，可以使用脂溶性维生素例如维生素A、维生素D、维生素E和维生素K。

任何合适的单糖，无论D-或L-单糖并且无论醛糖或酮糖，都可以作为检测装置上的试剂使用。单糖的例子包括丙糖例如甘油醛、四糖例如赤藓糖和苏塘、戊糖例如核糖、果胶糖、木糖、来苏糖和核酮糖、己糖例如阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔罗糖和果糖，以及庚糖例如景天庚糖。

任何合适的脂质可以作为检测装置上的试剂使用。脂质的例子包括三酰甘油例如硬脂酸甘油酯、棕榈酸甘油酯和三油精，蜡，磷酸甘油酯例如磷脂酰乙醇胺、卵磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇和心磷脂，鞘脂类例如鞘磷脂、脑苷脂、神经节糖苷，固醇例如胆固醇和豆甾醇以及固醇脂肪酸酯。脂肪酸可以是饱和脂肪酸例如月桂酸、豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸和二十四烷酸，或者可以是不饱和脂肪酸例如棕榈油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸。

在一个具体的实施例中，待检测的分析物包含或是抗原，检测装置上的结合试剂包含或是抗体。优选地，抗体特异地结合分析物。在一个例子中，检测装置用于夹心检测形式中，其中，结合试剂，例如抗体，作为试剂点处的试剂使用，并且另一种具有检测标签的结合试剂也用于在试剂点处形成标记的“结合试剂-分析物-结合试剂或抗体”夹心从而产生读出信号。作为备选，结合试剂作为试剂点处的试剂使用，并且具有检测标签的抗体也用于在试剂点处形成标记的“抗体-分析物-结合试剂”夹心从而产生读出信号。在一个例子中，夹心试验使用两种抗体，一个作为捕获试剂而另一个作为标签试剂。

检测装置也可以用于竞争检测形式中。在一个例子中，结合试剂，例如抗体，作为试剂点处的捕获试剂使用。加入液体中的或之前在检测装置上变干并被液体再溶解或再悬浮的具有检测标签的分析物或分析物类似物，将与样品中的分析物竞争结合试剂点处的捕获试剂。在另一个例子中，分析物或分析物类似物作为试剂点处的捕获试剂使用。结合试剂，例如抗体，具有检测标签，不是加入液体中的就是之前在检测装置上变干并被液体再溶解或再悬浮的。样品中的分析物将与试剂点处的分析物或分析物类似物竞争结合结合试剂，例如具有检测标签的抗体。

所述基质可以具有任何合适的结构。在一个例子中，所述基质可以具有多孔结构。所述基质可以包含任何合适的材料。例如，可以使用多孔塑料材料，例如聚丙烯、聚乙烯（优选非常高的分子量的）、聚偏二氟乙烯、乙烯乙酸乙烯酯、丙烯腈和聚四氟乙烯。参见例如，美国专利号6,187,598。它可以有利于制造过程中用表面活性剂预处理膜，因为这可以减小膜中任何固有的疏水性并因此增强它快速和有效地接受和传送潮湿样品。所述基质也可以从纸或其它纤维质材料中制造。在一些实施例中，所述基质包含或由硝化纤维或玻璃纤维制成。

在另一个例子中，所述基质可以具有非多孔的结构，例如，塑性固体表面。在一些实施例中，所述基质可以具有其它结构例如通道或其它引导的流体通路。在另一个例子中，所述基质包括塑料、具有亲水表面的基质薄膜，或与样品液体具有控制接触角的材料。

试剂点可以包含任何合适的试剂并且可以排列形成任何合适的图形。在一个例子中，多个试剂点包含相同的能够与分析物或另一种能够结合分析物的结合试剂相结合的结合试剂。多个试剂点形成基本上平行于液体样品流动方向的线条。当液体样品沿着检测装置横向流动时，分析物，如果存在于液体样品中的话，在每个试剂点处连续地结合结合试剂，直到分析物由于结合上游的试剂点而耗尽。分析物与试剂点的结合在试剂点处产生可确定的信号，并且位于试剂点处的可确定的信号的强度和/或数量提供了液体样品中分析物的定量或半定量。

在另一个例子中，多个试剂点包含不同的能够与不同分析物或其它能够结合分析物的结合试剂相结合的结合试剂。多个试剂点形成基本上平行于液体样品流动方向的线条。当液体样品沿着检测装置横向流动时，分析物，如果存在于液体样品中的话，在每个试剂点处结合结合试剂。分析物与试剂点的结合在试剂点处产生可确定的信号，并且位于试剂点处的可确定的信号的存在和/或强度表明液体样品中分析物的存在和/或数量。

仍在另一个例子中，多个试剂点包含不同的结合试剂组，每个结合试剂组能够与相同的分析物或另一种能够结合相同分析物的结合试剂相结合，并且不同组内的结合试剂能够与不同的分析物或其它的能够结合不同分析物的结合试剂相结合。每个试剂点组形成基本上平行于液体样品流动方向的线条，并且由不同的试剂点组形成的不同线条基本上相互平行。当液体样品沿着检测装置横向流动时，分析物，如果存在于液体样品中的话，在每组试剂点的每个试剂点处连续地结合结合试剂，直到分析物由于结合上游的试剂点而耗尽。分析物与试剂点的结合在试剂点处产生可确定的信号，并且位于试剂点处的可确定的信号的强度和/或数量提供了液体样品中不同分析物的定量或半定量。

还在另一个例子中，多个试剂点包含相同的能够与分析物或另一种能够结合分析物的结合试剂相结合的结合试剂。多个试剂点形成基本上平行于液体样品流动方向的多条线。每条线内的试剂点包含相同数量的结合试剂，但是不同线内的试剂点包含不同数量的结合试剂。当液体样品沿着检测装置横向流动时，分析物，如果存在于液体样品中的话，在每条线内的每个试剂点处连续地结合结合试剂，直到分析物由于结合上游每条线内的试剂点而耗尽。分析物与试剂点的结合在试剂点处产生可确定的信号，并且位于试剂点处的可确定的信号的强度和/或数量提供了液体样品中分析物的定量或半定量。不同线内的试剂点可以包含相同或不同数量的结合试剂。在一个实施例中，从检测装置的一端至另一端，在垂直于所述液体样品流方向的方向上，不同线内的试剂点包含连续不同数量的结合试剂，例如，连续增加或减少的试剂点数量。

还在另一个例子中，多个试剂点包含两个不同的结合试剂组。一组试剂点形成相对于液体样品流动方向成第一角度的线，而另一组试剂点则形成相对于液体样品流动方向成第二不同角度的线。在液体样品沿着检测装置横向流动后，其中一条线内的试剂点产生表明液体样品中分析物的存在和/或数量的信号，而另一条线内的试剂点产生表明检测正确进行的对照信号。当液体样品包含分析物且检测正确进行时，试剂点的两条线产生表明液体样品中分析物的存在和/或数量的阳性符号。当液体样品不包含分析物且检测正确进行时，只有一条试剂点线产生表明液体样品中分析物缺失的阴性符号。

两个不同试剂点组可以形成相对于液体样品流动方向的任何合适角度的线，并且试剂点可以产生任何合适的表明液体样品中分析物的存在、缺失和/或数量的读出信号。例如，一组试剂点形成基本平行于液体样品流动方向的线，而另一组试剂点形成基本垂直于液体样品流动方向的线。当液体样品包含分析物且检测正确进行时，试剂点的两条线产生表明液体样品中分析物的存在和/或数量的“+”符号，而当液体样品不包含分析物且检测正确进行时，只有一条试剂点线产生表明液体样品中分析物缺失的“-”符号。

还在另一个例子中，多个试剂点包含两个不同的试剂点组。当液体样品沿着检测装置横向流动后，一个组内的试剂点产生表明液体样品中分析物的存在和/或数量的字母数字符号，而另一组的试剂点产生表明检测正确进行的对照符号。字母数字信号可以用任何合适的形式。例如，字母数字信号可以是单词例如是（yes）、阳性（Pos）、阳性（Positive）、阴性（Neg）、阴性（Negative）、否（No）或很好（OK）。对照符号信号也可以用任何合适的形式。例如，对照符号信号可以是（+）符号。检测装置可以为任何形式的检测进行改装，例如，夹心或竞争检测。

还在另一个例子中，多个试剂点包含结合预期结合剂的试剂以及在试剂点上产生的表明所述试剂和结合剂之间的结合动力学性质的所述试剂和结合剂之间的结合图形。所述试剂和期望的结合剂可以是任何合适的或需要的物质。例如，所述试剂可以是抗原，结合剂可以是所述抗原的抗体，或反之亦然。在试剂点上产生的抗原和抗体之间的结合图形可以表明抗原和抗体之间的结合动力学性质。本装置可以用来表明任何合适的抗原和抗体之间的结合动力学性质。例如，动力学性质可以包括抗原和抗体之间结合的结合亲和力。结合亲和力可以用任何合适的信号读出来检测。例如，斑点前缘的结合图形可以表明结合试剂或抗体对抗原具有高结合亲和性，填满但通常变化的斑点表明低亲和性结合试剂，以及空白斑点表明结合试剂或抗体与抗原之间无特异性结合。参见，例如，图3。

还在另一个例子中，检测装置可以包含至少一组产生与液体样品中分析物的存在、缺失和/或数量或检测是否正确进行不相关的附加信号的试剂点。这类附加的试剂点可以用于任何合适的目的。例如，附加信号可以用来表明检测装置的可靠性、质量和/或识别，或液体样品的识别。所述附加信号可以具有任何合适的形式或图形。例如，所述附加信号可以包含字母数字信号。

还在另一个例子中，检测装置可以包含至少一组在样品添加位置周围形成圆形的试剂点，并且液体样品呈放射状地迁移通过所述试剂点组。还在另一个例子中，检测装置可以进一步包括通过装置一部分的流体。

所述基质可以具有任何合适的形式或形状。例如，所述基质可以是条形或圆形的形式。所述基质也可以具有合适数量的元素。例如，所述基质可以由单一元素制成或可以包含多种元素。

检测装置可以进一步包含与基质的液体交流上游或交流中的样品添加元件。样品添加元件可以用任何合适的材料制成，例如硝化纤维、玻璃纤维、聚丙烯、聚乙烯（优选非常高的分子质量的）、聚偏二氟乙烯、乙烯乙酸乙烯酯、丙烯腈或聚四氟乙烯。所述基质和样品添加元件可以包含相同或不同的材料。

检测装置可以进一步包含与基质的液体交流下游和交流中的液体吸收元件。液体吸收元件可以用任何合适的材料制成，例如纸或纤维质材料。

检测装置可以进一步包括含有用于表明适当的液体样品流和/或有效检测结果的方法的对照位置。可以使用任何合适的方法。在一个例子中，所述方法包含与带有检测标签的也结合分析物的结合试剂相结合的结合试剂。在另一个例子中，所述方法包含与带有检测标签的不结合分析物的结合试剂相结合的结合试剂。还在另一个例子中，所述方法包含一旦液体沿着或通过对照位置流动就产生检测信号例如颜色或电信号的底物。

在一些实施例中，至少一部分基质被固体背衬支持。在其它的实施例中，基质的一半、多于一半或全部的部分被固体背衬支持。固体背衬可以用任何合适的材料制成，例如固体塑料。如果检测装置包括电极或其它电学元件，那么固体支持物通常应该包含非绝缘材料。

在一些实施例中，标签试剂可以在检测装置上变干并且干燥的标签试剂可以被液体例如样品液体和/或另外的液体重新溶解或重新悬浮，并且横向运送通过检测装置从而产生读出、对照和/或其它信号。例如，基质的一部分，在至少两个试剂点的上游，可以包含干燥的标签试剂，所述标签试剂能够被液体样品和/或进一步的液体迁移至所述至少两个试剂点和/或对照位置从而产生检测信号。所述干燥的标签试剂可以位于检测装置上任何合适的位置。在一个例子中，干燥的标签试剂位于检测装置上样品添加位置的下游。在另一个例子中，干燥的标签试剂位于检测装置上样品添加位置的上游。标签试剂的类型可以根据预期的检测形式而定。例如，如果检测装置要用于夹心试验，那么标签试剂应该能够结合，并且优选地能够特异地结合到分析物或与分析物结合的其它物质上。相同的标签试剂也可以用于确定的竞争结合试验。对于其它类型的竞争结合试验，标签试剂应该是连接着检测标签的分析物或分析物类似物。

在一些实施例中，检测装置可以进一步包括，至少两个试剂点上游的，包含干燥的标签试剂的结合元件，所述标签试剂能够被液体样品和/或进一步的液体迁移至所述至少两个试剂点和/或对照位置从而产生检测信号。所述结合元件可以位于检测装置上样品添加位置的下游。所述结合元件也可以位于检测装置上样品添加位置的上游。在一些实施例中，所述标签试剂结合液体样品中的分析物。在其它的实施例中，所述标签试剂与液体样品中的分析物在所述至少两个试剂点处竞争结合分析物的结合试剂。

可以使用任何合适的标签。所述标签可以是可溶的标签，例如比色的、放射性的、酶的、发光的或荧光的标签。所述标签也可以是颗粒或微粒标签，例如微粒直接标签，或有色颗粒标签。典型的颗粒或微粒标签包括胶体金标签、乳胶颗粒标签、纳米粒标签和量子原子团标签。取决于具体的结构，标签例如比色的、放射性的、酶的、发光的或荧光的标签，可以是可溶标签或颗粒或微粒标签。

在一些实施例中，标签试剂在稳定标签试剂的材料在场的情况下变干，促进了标签试剂在液体中的溶解或重新悬浮，和/或促进了标签试剂的流动性。可以使用任何合适的材料。例如，所述材料可以是蛋白，例如，微溶的蛋白、肽、多糖、糖例如蔗糖、多聚物、凝胶或去垢剂。参见，例如，美国专利号5,120,643和6,187,598。

本检测装置可以与任何合适的样品液体一起使用。在一个例子中，单独的样品液体用于运送分析物和/或标签试剂至所述至少两个试剂点。在另一个例子中，显色液用于运送分析物和/或标签试剂至所述至少两个试剂点。仍在另一个例子中，样品液体和显色液都用于运送分析物和/或标签试剂至所述至少两个试剂点。

在一些实施例中，检测装置可以进一步包含遮盖至少检测装置一部分的壳体，其中壳体包含允许从或朝着所述至少两个试剂点的上游添加样品的样品添加接口以及围绕所述至少两个试剂点的光学开口从而允许在两个试剂点处的信号检测。所述光学开口可以用任何合适的方式实现。例如，所述光学开口可以简单地是敞开的空间。作为备选，所述光学开口可以是透明的盖子。

在其它的实施例中，所述壳体可以遮盖整个检测装置。仍在其它的实施例中，基质的样品接收部分或样品添加元件至少一部分没被壳体遮盖并且样品在壳体外面被添加到基质的样品接收部分或样品添加元件的一部分，然后被运送至所述至少两个试剂点。所述壳体可以包含任何合适的材料。例如，所述壳体可以包含塑料材料、能进行生物降解的材料或纤维质材料。在另一个例子中，所述壳体，无论部分或它的全部，可以包含不透明的、半透明的和/或透明的材料。

在一些实施例中，本发明提供检测装置，其中液体样品已经沿着检测装置横向迁移从而在所述至少两个试剂点处产生检测信号。

C．使用具有二维特征的侧向层析装置检测分析物的方法

另一方面，本发明提供使用上面的检测装置检测分析物的方法。在一个典型的实施例中，本发明提供在液体样品中检测分析物的方法，所述方法包括a）用上述检测装置接触液体样品，其中所述液体样品加在所述至少两个试剂点上游的检测装置的位置上；b）运送分析物，如果存在于液体样品中的话，至所述至少两个试剂点；以及c)评估在所述至少两个试剂点处产生的信号的存在、缺失、数量和/或图形来确定液体样品中分析物的存在、缺失和/或数量。所述试剂点处的信号可以通过任何合适的反应产生，例如包含分析物、位于试剂点处的试剂、加入液体样品和/或其它试剂的试剂和/或使用前在检测装置上变干并被液体样品或其它液体运送至试剂点的其它试剂在内的化学的、生物化学的、电气化学的，和/或结合的反应。

在另一个典型的实施例中，所述试剂点处的信号可以通过包含分析物和位于试剂点的试剂，以及加入液体样品中的或使用前在检测装置上变干并被液体样品或其它液体运送至试剂点的标签试剂的结合反应产生。例如，所述方法包括a）用上述检测装置接触液体样品，其中所述液体样品加在所述至少两个试剂点上游的检测装置的位置上；b）运送分析物，如果存在于液体样品中的话，以及标签试剂到所述至少两个试剂点；以及c)评估所述至少两个试剂点处的信号的存在、缺失、数量和/或图形，例如，在所述至少两个试剂点处由标签试剂产生的信号，来确定液体样品中分析物的存在、缺失和/或数量。

在一些实施例中，液体样品和标签试剂被预先混合形成混合物并将混合物加入检测装置。例如，标签试剂可以被提供或贮存在液体中，然后可以与样品液体预先混合形成混合物并将混合物加入检测装置。在另一个例子中，标签试剂可以在某位置或容器中干燥而不与检测装置进行液体交流，例如，在检测管中或井例如微量滴定板井。在使用中，样品液体可以加入容器例如检测管或井中从而形成混合物并且混合物可以随后被加入检测装置。

在其它的实施例中，检测装置包含使用前干燥的标签试剂并且所述干燥的标签试剂被溶解或重新悬浮，并通过液体样品和/或其它液体运送至所述至少两个试剂点。所述干燥的标签试剂可以位于检测装置上任何合适的位置。例如，干燥的标签试剂可以位于样品添加位置的下游，并且所述干燥的标签试剂可被溶解或重新悬浮，并通过液体样品和/或其它液体运送至所述至少两个试剂点。在另一个例子中，干燥的标签试剂可以位于样品添加位置的上游，并且所述干燥的标签试剂可被溶解或重新悬浮，并通过另一种液体运送至所述至少两个试剂点。

在一些实施例中，所述标签试剂可以被溶解或重新悬浮，并单独通过液体样品运送至所述至少两个试剂点。在其它的实施例中，分析物和/或标签试剂可以被溶解或重新悬浮，并通过另一种液体运送至所述至少两个试剂点。仍在其它的实施例中，分析物和/或标签试剂可以被溶解或重新悬浮，并通过样品液体和另一种液体例如显色液运送至所述至少两个试剂点。

本检测装置可用于检测任何合适的样品液体中的分析物。在一些实施例中，所述液体样品可以是体液样品，例如全血、血清、血浆、尿液样品或唾液。这类体液样品可以直接取用或使用前可被加工，例如富集、纯化或稀释。在其它的实施例中，液体样品可以是从固体或半固体生物材料例如噬菌体、病毒、细菌细胞、真核细胞、真菌细胞、哺乳动物细胞、培养细胞、细胞或亚细胞结构、细胞聚集体、组织或器官中提取的液体提取物、悬浮液或溶液。在具体的实施例中，样品液体从哺乳动物或人类资源中获得或提取。还在其它的实施例中，液体样品是来自生物的、法医的、食物、生物战或环境资源的样品。在其它的实施例中，液体样品是临床样品，例如人或动物的临床样品。还在其它的实施例中，液体样品是人造样品，例如用于质量控制或标准化目的的标准样品。

本检测装置可以用于检测任何合适的样品液体中分析物的存在、缺失和/或数量。在一些实施例中，本检测装置用于检测任何合适的样品液体中分析物的存在或缺失，即提供是或否的答案。在其它的实施例中，本检测装置用于定量或半定量液体样品中分析物的数量。

本检测装置可以用于检测任何合适的样品液体中分析物的存在、缺失和/或数量。作为备选，本检测装置可以用于检测液体样品中多种分析物的存在、缺失和/或数量。还在其它的实施例中，本检测装置可以用于定量或半定量液体样品中多种分析物的数量。

本检测装置可以用于检测样品液体中任何合适的分析物的存在、缺失和/或数量。典型的分析物包括无机分子、有机分子或其复合体。典型的无机分子可以是离子例如钠、钾、镁、钙、氯、铁、铜、锌、锰、钴、碘、钼、钒、镍、铬、氟、硅、锡、硼或砷离子。典型的有机分子可以是氨基酸、肽、蛋白、核苷、核苷酸、寡核苷酸、核酸例如DNA或RNA分子或其混合物、维生素、单糖、寡糖、碳水化合物、脂质及其复合体。在一些实施例中，分析物是细胞、病毒或分子。在其它的实施例中，分析物是hCG、hLH、hFSH、hTSH、疾病或紊乱标签，例如，心脏病生物标记、传染性生物的抗原、抗传染性生物的抗体，等等。

本方法可以用于任何合适的目的。例如临床诊断、预测、风险评估和预测、分层和治疗监测以及调整。在另一个例子中，本方法可用于多种研究目的，例如基础研究、候选药物筛选、动物研究以及临床试验。仍在另一个例子中，本方法可用于标准制订、质量控制、违禁药物筛选、食品安全、环境安全、工业安全，污染、生物战试剂的检测、筛选药物或医药品，以及使用生物反应器监控生产质量寻找不想要的分子等的测试中。本检测装置和方法可用于任何合适的环境中，例如在实验室、诊所、医院、医生的办公室、家里、自然环境、战争场地和现场急救者环境例如火、护理人员、警察行动的检测中。

D．制造具有二维特征的侧向层析装置的工艺

在另一方面，当前的公开内容为制作用于检测液体样品中分析物的检测装置提供了制备工艺工艺，所述工艺包括在基质上产生许多试剂斑点，使检测装置包括至少两种所述试剂点，其中至少两种所述试剂不重叠并且相互之间充分地相隔以便当所述液体样品沿着所述基质横向层析时，所述液体样品流向、通过和/或围绕所述两种试剂斑点之一的流动基本上不会影响流向、通过和/或围绕所述另一种试剂斑点的流动，其中所述两种试剂斑点中的每一种既不是横穿所述基质整个宽度的垂直于所述液体样品流方向的试剂线也不是完全环状的试剂线，并且在液体样品沿着所述检测装置横向层析并通过所述至少两种试剂斑点后，所述至少两种试剂斑点形成预定的图形来表明所述液体样品中所述分析物的存在、缺失和/或数量。

工艺

多个试剂点可形成各种适当的预先确定的图案。在一些实施例中，所述多个试剂点组成线条，多个线条，符号，几何图形或字母数字形状。可组成任何适当的字母数字形状。典型的字母数字形状包括字母、单词、数字或相关组合。试剂点组成的线可在任何适当的方向上形成。在实例中，试剂线条基本与液体样品流动的方向平行。在另一个实例中，试剂线基本与液体样品流动的方向垂直。在另一个实例中，试剂点组成多条线，包括至少一条基本与液体样品流动方向平行的线，以及至少一条基本上与液体样品流动方向垂直的线。

试剂点可通过任何适当的方法在基质上形成。在一些实施例中，通过将试剂在基质上预先确定的位置分配形成多个试剂点。可以使用任何适合的分配技术或方法。例如，试剂可以按需求的方法通过滴定或利用试剂力学转移的印刷过程来分分配。可以使用任何适合的按需求方法的滴定。例如，使用喷墨或电磁阀分配器、压电分配器、丝网印刷、空气喷射或喷雾技术、中空针打印或近接触式分配按要求进行。

检测装置上的试剂点可以有任何适当的尺寸。在一个实例中，至少有一个试剂点的直径为0.1-1um、1-10um、10-50um、51-100um、101-200um、201-300um、301-400um、401-500um和501-1000um。在另一个实例中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点的直径为0.1-1um、1-10um、10-50um、51-100um、101-200um、201-300um、301-400um、401-500um和501-1000um。仍然是在另一个实例中，至少有一个试剂点的直径或表面积为基质直径或表面积（通过膜的长宽来计算）的10%、5%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%、0.001%或更小。而在另一个实例中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点直径或表面积为基质直径或表面积（基质表面的长乘以宽）的10%、5%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%、0.001%或更小。

检测装置的试剂点具有相同或不同的尺寸或直径。在一个实例中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点基本上具有相同的尺寸或直径。在另一个实例中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点基本拥有不同的尺寸或直径。

检测装置中的试剂点可以有任何适当的形状，如任何适当的规则或不规则形状。在一个实例中，试剂点中至少一个为线形、圆形、棒形、方形、三角形、矩形或不规则形。在另一个实例中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部试剂点的形状为线形、圆形、棒形、方形、三角形、矩形或不规则形。检测装置中的试剂点可以有相同或不同的形状。在一个实例中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部试剂点拥有不同的形状。

试剂点与试剂点之间保持任何适当的空间或距离。在一个实例中，试剂点之间的距离为1-10um、10-50um、51-100um、101-200um、201-300um、301-400、401-500或501-600um。试剂点之间的空间或距离可以相同或不同。在一个实例中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部试剂点之间的空间或距离基本是相同的。在另一个实例中，至少四分之一、三分之一、二分之一或全部试剂点之间的空间或距离是不同的。

试剂点可在基质的任何适当的位置或侧面形成。在一个实例中，本发明的工艺包括由多个试剂点形成单层或多层多个试剂点层。在另一个实例中，本发明的工艺包括在基质两侧面由多个试剂点形成至少一层试剂层。在另一个实例中，本发明的工艺包括在基质两侧面由多个试剂点形成多层试剂层。而在另一个实例中，本发明的工艺进一步包括在多个试剂点形成的多层试剂层之间的干燥步骤。

在某些实施例中，本发明提供了用于检测液体样品中分析物的检测装置，它由上述工艺制造而成。

E.典型实施例

在某些实施例中，本发明提供了一种以侧向层析的方式（分配捕获试剂的几何形状，允许以非标准格式产生信号分配方法，包括在检测基质上不干扰试剂层析的点（或“像素”），其结果是多个小信号特征产生并结合形成符号和字母。在其它实施例中，本发明为一种新装置提供了一种可设置标记的兼具多重检测和定量检测的侧向层析检测方法。

本方法的应用可产生新颖的实施例和改进的分析方式。本发明也提供了能够在单个装置中进行多重检测的独特的装置结构以及能够改善检测的定量或定性结果描述的独特的装置结构。

本发明一方面提供了一种将分配化学或生物试剂（“试剂”）

以预先确定的“无序”模式的分配到多孔的和/或固体基质如塑料薄膜，它对液流和穿过印迹试剂的微颗粒具有较低的阻力。这些模式具在所述样品扩散距离的空间距离上/共轭流动至系统中的主流方向上相互隔离的二维特性。这些特征的维度和位置彼此相关使得检测系统中的每种特征都能与试剂独立地相互作用而不会堵塞所述基质或者造成层析中断。这些特征维度和相关位置会根据材料和试剂的性质而改变，如表面型（固体/多孔），多孔的的话孔径大小以及试剂捕获亲和力。

本方法可用于在侧向层析膜或其他基质上，与流动方向垂直（与传统的侧向层析系统一样）或平行地生成复合物或简单的试剂模式。本方法还可用在不同的材料上产生一些用于导流液体的特征，这些材料包括消化纤维素膜、玻璃纤维和塑料薄膜。本方法可进一步用来产生作各种形状的符号，包括线条、点和几何图形以及字母数字形状。

在本发明的一些实施过程中，本方法可用于定量检测。像素模式提供当分析物流经像素区域时分析物的浓度消耗，这在图6(a)和6(b)示意性显示。同样的原则适用于颗粒状物质和非颗粒状物质（分子）标签。典型的检测方式如下：1.横穿所述侧向检测试纸膜分配分配像素区域，所述像素区域包括所显示模式的横跨所述检测试纸膜的试剂点。这些试剂点可能会在点与点之间产生横向扩散的距离内抵消或自然分离。当样品流经这个区域，分析物会和试剂点结合，当它进一步迁移通过所述检测试纸膜时会被逐渐消耗。当结合随着流动逐步贯穿整个系统时，分析物浓度的消耗可通过从基质底部到顶部信号强度的减少表现出来。这形成成了通过目测或采用阅读器直接测量浓度梯度以实现分析物滴定或定量检测量检测模式的基础。

可通过如下设想对本技术进一步改良，即通过在单一维度上滴定捕捉试剂，当样品沿着所述试纸条跑时形成二维结合阵列。（图示见图7）。在本系统中，结合像素的试剂线在流动方向上并排分布，每条试剂线包括不同浓度的结合试剂。该二维结合模式由此产生了一个系统，所述系统可以在具有宽动态范围的系统中产生分析物的定量结果。

进一步改良包括用这种形式进行多重检测或定量检测。如何将像素格式应用于多重检测规格的实例见图8，图中用于4种分析物的像素像素大小为250um，像素之间间隔为100um的4x20的格式。样品层析方向上设置了20个像素维度（pixeldimension）。

由于信号产生不依赖于捕获试剂的垂直于流动方向，所以本方法可用于产生字母数字或图形结果。通过以单词或符号的模式更简单的读取检测结果或编码数值结果或产物的识别符号表示检测结果，可以设想更多可能的实施例。

在现有的实施例中，分析基质的制作就是独立的试剂点的分配过程。分析的分配方法基于不同的技术实施，包括喷墨、空气喷射或喷雾技术、中空针打印或压电。还可以设想其他分配方法。

在优选的实施方案中，分配技术采用印刷。在此实施例中此方法包括在试剂像素流动路径中印刷产生独立的具有维度（在所有三个轴上）的特征，其允许捕获分析物和信号试剂以及信号显示完全独立，不论试剂结合的亲和力如何，只要试剂对分析物有一定的亲和力即可。

独立特征的三维基质排列会产生较大的图形，即当被视为平面时，产生可用于读取检测结果的符号（字母数字、线或点）的标记代表检测结果。结果读取是定性的或定量的，可以通过目测或读取器进行。对于定性测试，这类标记的存在或缺失都可代表检测结果。在检测结果定量的情况下，自然情况下标记的总量、大小或强度都代表了测量结果。

在另一种优选的实施方案中，分配技术采用多层印刷。在此实施例中此方法包括在多层试剂的流动路径中印刷产生独立的具有维度（在所有三个轴上）的特征，其允许捕获分析物和信号试剂以及信号显示完全独立，不论试剂的结合亲和力如何，只要试剂对分析物有亲和即可。多层印刷会在基质的同一侧面或对侧面进行以在基质的不同深度产生特征。

独立特征的三维基质排列会产生较大的图形，即当被视为平面时，产生可用于读取检测结果的符号（字母数字、线或点）代表检测结果的信号。结果读取是定性的或定量的，可以通过目测或读取器进行。对于定性测试，这类标记的存在或缺失都可代表检测结果。在检测结果定量的情况下，自然情况下标记的总量、大小或强度都代表了测量结果。

潜在的实施方案的实例

在所有上述的实施例中，检测中用于产生信号的信号试剂包括可视的、顺磁性的、光激发性的颗粒或分子。光激发性包括荧光、冷光、上转换荧光粉，以及加酶后变得可视的、发出荧光和电化学信号的。可以设想其他类型的信号产生。

1.侧向层析条上的字母数字符号

1.1典型应用：妊娠检测中分别用+和-表示阳性或阴性。特殊应用无限制且仅作说明使用。本实例说明了侧向层析条上用于产生+和-的方法。

在大部分的妊娠检测中，两种抗体用于结合hCG分子以形成阳性信号。抗hCG-α在测试线上形成条带，抗hCG-β与用于产生信号的标记相结合。它们通常为单克隆抗体。系统的对照线是抗鼠抗体，无论hCG是否存在它都与抗hCG-β直接结合。在典型的系统中，测试线和对照线为两条独立的线，条带与层析方向垂直。在本实施例中，一条线垂直于层析方向形成条带，另一条则在层析方向上形成条带，在条带中心相互交叉。当没有分析物存在是，只产生一条线，出现“-”。当分析物存在时，出现“+”，产生两条线。这在我们的实施例中也是可能实现的，但在标准侧向层析系统中不太可能，因为在我们的系统中能在层析方向上产生清楚的测试线。当试剂线成角度的层析时形成“x”而不是“+”时的格式也能起作用。

1.2.本实施例在以下情况下也能起作用：，当检测是竞争性分析，例如药物滥用检测。在这种情况下，分析物的存抑制第二条线形成。尽管是阳性，这个系统也可能出现“-”符号，因此需要使用一种替代性符号（见下述实施例2）。

和“+”或“-”一样，本方法通过侧向层析的报告机制还可以产生单词符号。单词“YES”可以印刷在测试条上并在分析物存在下显示出来。在生物战的应用中，如炭疽检测，结果读取至关重要，如果出现单词“危险”，那么战士或技术人员就会对一个正在进行中的可能暴露的事件消除怀疑。

2.竞争性横向层析分析中的字母数字阳性报告系统

在竞争性的分析系统中，分析物的存在导致测试线的消失。这种报告形式会导致一些用户在使用时产生混乱，他们更习惯用测试线的出现代表阳性。对于检测小分子，例如药物滥用，或很多重要的生物分子，竞争性分析是一种重要的分析方法。在侧向层析条上产生符号的系统可以优化读取。例如，对照线可设置为“+”号，它在所有情况下都会出现。测试线可以打印成字母数字系列，例如单词“Not”。因此在没有分析物存在的情况下，结果就会出现“Not+”。如果分析物存在，单词“Not”就不会出现，只会出现“+”号。很容易设想此功能的其他形式。

3.定量

3.1本检测格式的一个实施例是创建捕获试剂的一系列独立点，或贯穿检测条阅读区域的“像素”。当样品通过阅读区时，分析物在所有捕获点上被结合。当样品迁移穿过整个系统时，分析物因此被耗尽，这有可能导致沿着检测条长度方向的浓度梯度的产生。这可用于产生“温度计”风格的结果，其中系统反应区域的高度和强度与系统分析物的浓度相关。这可用于定量或半定量系统中分析物的滴定（例如，心脏生物标记如TnI或BNP、FABP、CKMB等蛋白或抗体浓度）。

3.2在第二个实施例中，在膜上制作了印刷试剂的独立通道。“通道”是沿着层析方向的不连续区域，每个通道由一系列上述实例中描述的捕获像素组成。在层析方向上有两条以上的并排的不连续通道。不需要任何物理隔离。捕获试剂可以是不同的试剂，在多重检测的实例中，每条通道从单一的样品中检测不同的分析物。捕获试剂也可以是相同的试剂，但有着不同浓度。因此3.1中描述的滴定作用可以在两个维度上进行，通过轴向垂直于层析方向上的捕获试剂的滴定来进行，以及在层析方向上随着样品移动通过捕获阅读区域样品被逐渐消耗的滴定来进行。这将允许对宽动态范围内的分析物进行滴定和定量。这有利于正常和测试目标或样品中宽范围存在的分析物的水平定量（例如，可应用于检测浓度低至10mIU/ml，高至250,000mIU/ml的hCG的存在，大部分侧向层析系统都不能处理这样的动态范围）。

这种方式同样有利于评估结合动力学和筛选用于侧向层析或其它分析方式的抗体或其它试剂。例如，当筛选用于侧向层析方式的抗体时，它有利于筛选高亲和力抗体。这些抗体在无序分析中产生显著的结合特征（例如，高亲和力结合会典型地显示为强的前沿试剂点而不是均匀的试剂点）。亲和力越高，当样品在检测条上迁移经过时就有越多的抗体被迅速从样品中抽出。因此认为高亲和力结合系统可通过评估独立检测点的显示图形来标示，，以及观察检测条显示图形的走势有多高生产来标示。

4.检测鉴定

检测条上印刷的字母数字仅仅当所述条带显示时才会出现。可使用对照线结合系统来显示这种代码，事实上这种代码可能就是对照线或装置上其它可见部分。这可以用于防伪，质量控制或产品识别，或者要求条带识别核实的应用（例如，基于与处方相关联的诊断学电话或互联网）。

5.非线性实施例

像素化概念允许产生交替的分析模式，如径向系统中将样品加至中间的加样槽中，样品沿着加样槽周围的所有方向迁移。这可用于上述3中描述的多重化或定量。这种像素化概念还可用于产生复合物层析图形结果，如印刷的液体圈或其它微流格式。

6.侧向层析系统中的层析或杂交层析

像素化概念可应用于层析通过测试格式，其中包括液体垂直运动和水平运动的某些形式。层析通过测试，其中试剂垂直而非水平地通过测试，通常用于多重步骤不是问题时（例如在临床实验室中，由训练有素的工作人员操作检测过程并且不需要做CLIAwaiver）。它们还被用于低成本、低复杂性的检测环境，如用于发展中国家的HIV检测）。层析层析通过格式会遇到一个典型的问题就是检测结果的读取，涉及到通过目测或偶尔通过读取器来读取独立点的检测结果。本系统可用于产生更易读取的测试点图形。

7.非标准材料和结构

像素化概念或格式有助于应用于代替测试结构。本质上，在膜上制备试剂格式的这个方法允许允许有使用低成本膜的分析，如硝化纤维，它可被穿过膜的侧向层析试剂探测到。这可适用于纸或其它基质。该方法可与绑定方法如Quantiscientifics蛋白绑定系统配合，，产生易于使用的二维阵列，所述二维阵列可采用侧向层析技术探测到，从而便于使用、除去了对复杂的昂贵的生产装置以及昂贵的基板和滑道的要求。这同样可应用于核酸阵列中。

8.三维像素整列

在本实施例中，将试剂阵列印刷在多孔亲水基质两侧面，例如例如，硝化纤维素膜或固体的亲水化基质如经胞浆处理或使用其他方式亲水化处理的塑料薄膜）。捕获试剂针对相同或不同的分析物。当检测分析在基质两侧进行时，检测可以独立分析。

9.信号读取

.这些实施例中的任何一个或全部都可通过目测或使用读取系统读取检测结果。

一方面，本发明提供了诊断性的检测装置，该装置拥有一种或多种试剂阵列，试剂分配在单一条带上的像素化阵列中，以不阻碍液体流经底物的方式被间隔开，允许在样品和不同试剂之间沿着并穿过检测条均匀地发生连续的反应。试剂的独立的像素可以和测试样品中的特异性元素起反应并整体地或分别地形成可以定量或定性读取的信号。信号可以是预先确定的标记形状。

在一些实施例中，为了生成可以检测的用来指示两种以上试剂的信号，两种以上的不同的试剂组可在单一条带上按顺序分配开来。为了生成可以检测的用来指示检测样品中两种以上试剂的信号，两种以上的不同的试剂组可在单一条带上共同分配于单独的阵列中。两种以上的试剂还可被分配于拥有至少两层叠印试剂的三维阵列中。在其它实施例中，试剂组可以如下方式分配，允许信号在检测条层析的方向上产生，允许产生定性或定量信号或多重结果。

在另一方面，本发明为制作诊断性检测装置提供了一种方法，该方法对于分析基质中的液体检测样品介质（材料）具有低流阻，它包括如下步骤：在亲水或亲水化底物材料上按规定的二维像素化阵列图形分配至少一种试剂材料，各像素液体流量不限制以使得各像素在本装置的层析路径上不产生明显的阻力。

在某些实施例中，试剂可用下列方式分配：样品材料和特异性试剂像素之间的反应在基底材料上生成至少一种可以检测的信号，如生成可识别的符号或规定的表示检测结果的图形。标记可以为字母数字、集合图形或其它预先确定的形状。典型的试剂包括抗体、抗原、核酸如DNA或RNA、基础分子、蛋白、肽或任何其它的大分子、小分子。

像素可以有任何适当的大小。在某些实施例中，像素具有约0.1-1um、1-10um、10-50um、51-100um、101-200um、201-300um、301-400um、401-500um或501-1000um的大小或直径。像素之间，尤其是相邻的像素之间可以具有任何适当的间隔空间。在某些实施例中，像素或相邻像素间最小的间隔空间或距离约为1-10um、10-50um、51-100um、101-200um、201-300um、301-400um、401-500um或501-600um。

任何适当的方法或技术都可用于分配像素。在某些实施例中，像素分配方法可以使用喷墨或电磁阀分配器、压电分配器、丝网印刷、空气喷射或喷雾技术、中空针打印或近接触式分配和任何其它商业印刷工艺，利用试剂的机械转移，按要求进行滴定。

在另一方面，本发明在诊断性检测中提供了通过下述方式制作三维反应基质的方法：将试剂按规定的像素化图形分配，干燥分配的试剂，在第一层试剂层顶上或多孔基质的相反一侧再分配至少一层额外的试剂像素层，在基质中形成三维像素结构，分配后干燥每一层。

而在另一方面，本发明提供了制作诊断性检测装置的方法，包括利用包括下述步骤的方法加工的反应基质：以规定的像素化图形分配、转移试剂，干燥分配的试剂，在第一层试剂层顶上或非多孔基质的相反一侧再分配或转移至少一层额外的试剂像素层，分配后干燥每一层，从而形成了拥有像素化层析路径的基质，基质的任何一面都允许同一基质上同时进行两种检测。

本发明通过下列典型实施例得到进一步说明：

1.用于检测液体样品中分析物的检测装置，包括基质上的多个试剂点，其中至少两个试剂点不重叠并且相互之间有足够的空间隔开以至于当液体样品侧向流经基质时，液体样品流向、经过和/或围绕一个试剂点基本不影响液体样品流向、经过和/或围绕另一个试剂点，各试剂点既不是一条朝着液体层析方向垂直横穿整个基质宽度的试剂线也不是由试剂线组成的完整的环，并且在液体样品侧向流经检测装置并经过至少两个试剂点后，所述至少两个试剂点形成预先确定的图案以显示液体样品中分析物的存在、缺失和/或总量。

2.实施例1中的检测装置，其中所述多个试剂点包括两个试剂点。

3.实施例1中的检测装置，其中所述多个试剂点包括两个以上试剂点。

4.实施例3中的检测装置，其中多个试剂点包括至少10、50、100、500、1,000、5,000、10,000或更多试剂点。

5.实施例3-4任何一个中的检测装置，其中至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点没有重叠且相互之间有足够的空间隔开，液体样品层析经过和/或围绕一个试剂点中基本不影响液体样品层析经过和/或围绕另一个试剂点。

6.实施例中的检测装置，其中预先确定的图形选自线条、多个线条线、符号、几何形状和字母数字形状组成的组。

7.实施例6中的检测装置，其中所述字母数字形状为字母、单词、数字或相关组合。

8.实施例6中的检测装置，其中线形基本与液体样品层析方向平行。

9.实施例6中的检测装置，其中所述线条基本与液体样品层析方向垂直。

10.实施例6中的检测装置，其中所述多条线包括至少一条基本与液体样品层析方向平行的线以及至少一条基本与液体样品层析方向垂直的线。

11.实施例1-10任何一个中的检测装置，其中所述多个试剂点包括不同的试剂，且检测装置用于检测液体样品中的多种分析物。

12.实施例1-10任何一个中的检测装置，其中所述多个试剂点包括相同试剂，且检测装置用于检测液体样品中分析物的总量。

13.实施例12中的检测装置，其中所述多个试剂点包括等量的试剂。

14.实施例12中的检测装置，其中所述多个试剂点包括不等量的试剂。

15.实施例1-14任何一个中的检测装置，其中至少有一个试剂点的直径为0.1-1um、1-10um、10-50um、51-100um、101-200um、201-300um、301-400um、401-500um和501-1000um，或至少有一个试剂点的直径或表面积为基质直径或表面积（基质表面的长乘以宽）的10%、5%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%、0.001%或更小。

16.实施例15中的检测装置，其中至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点的直径为0.1-1um、1-10um、10-50um、51-100um、101-200um、201-300um、301-400um、401-500um和501-1000um，或至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点直径或表面积为基质直径或表面积（基质表面的长乘以宽）的10%、5%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%、0.001%或更小。

17.实施例15中的检测装置，其中至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点基本具有相同的大小或直径。

18.实施例1-17任何一个中的检测装置，其中至少一个试剂点具有选自线形、圆形、棒形、方形、三角形、矩形和不规则形组成的组的一种形状。

19.实施例18中的检测装置，其中至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点具有来自线形、圆形、棒形、方形、三角形、矩形和不规则形组成的组的一种形状。

20.实施例18中的检测装置，其中至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点具有相同的形状。

21.实施例1-20任何一个中的检测装置，其中至少两个所述试剂点边缘之间的距离约为1-10um,10-50um,51-100um,101-200um,201-300um,301-400,401-500或501-600um。

22.实施例21中的检测装置，其中至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点之间的距离基本是相同的。

23.实施例1-22中的检测装置，其中至少一个试剂点包括可结合分析物的试剂或其它可结合分析物的结合试剂。

24.实施例23中的检测装置，其中试剂可特异结合分析物或结合其它可结合分析物的结合试剂。

25.实施例23中的检测装置，其中至少四分之一、三分之一、二分之一或全部的试剂点包括可以结合分析物的试剂或其它可以结合分析物的结合试剂。

26.实施例25中的检测装置，其中试剂可特异结合分析物或结合其它可结合分析物的结合试剂。

27.实施例1-26任何一个中的检测装置，包括多层多个试剂点。。

28.实施例1-27任何一个中的检测装置，在所述基质的两侧面都至少包括所述多个试剂点。

29.实施例1-27任何一个中的检测装置，其中试剂为无机分子、有机分子或它们的复合物。

30.实施例25中的检测装置，其中有机分子选自氨基酸、肽、蛋白、核苷、核苷酸、寡核苷酸、核酸、维生素、单糖、寡糖、糖水化合物、脂肪和它们的复合物组成的组。

31.实施例30中的检测装置，其中所述蛋白是抗原或抗体。

32.实施例1-31任何一个中的检测装置，其中所述基质具有多孔结构。

33.实施例32中的检测装置，其中所述基质包括硝化纤维素、玻璃纤维、聚丙烯、聚乙烯（高分子量优先）、聚偏二氟化物、乙烯乙酸乙烯酯、丙烯腈和/或聚四氟乙烯-乙烯。

34.实施例1-31任何一个中检测装置，其中基质具有非多孔结构。

35.实施例32中的检测装置，其中基质包括塑料膜、具有亲水表面的基质膜或与样品液体有可控接触角的材料。

36.实施例1中的检测装置，其中多个试剂点包括相同的可结合分析物的结合试剂或可结合分析物的其它结合试剂，当液体样品侧向流经检测装置时，多个试剂点组成的线基本与液体样品层析方向平行，如果液体样品中存在分析物，分析物在各试剂点相继与结合试剂相结合直到分析物通过结合到上游试剂点而耗尽，分析物与所述试剂点结合在试剂点生成可检测的信号，并且试剂点处该信号的强度和/或总量为液体样品中的分析物提供了定量或半定量分析。

37.实施例1中的检测装置，其中多个试剂点包括可结合不同分析物的不同的结合试剂或可结合分析物的其它结合试剂，当液体样品侧向流经检测装置时，多个试剂点组成的线基本与液体样品层析方向平行，如果液体样品中存在分析物，分析物在各试剂点与结合试剂相结合，分析物与试剂点结合在试剂点生成可检测的信号，并且试剂点处该信号的存在和/或强度显示了液体样品中分析物的存在和/或强度。

38.实施例1中检测装置，其中多个试剂点包括不同组别的结合试剂，各组结合试剂可与相同的分析物结合或其它结合试剂可与相同的分析物结合，不同组别的结合试剂可与不同的分析物结合或其它结合试剂可与不同的分析物结合。

各组试剂点形成基本与液体样品层析方向平行的试剂线，并且由不同组别的试剂点形成的不同的试剂线基本相互平行。

当液体样品侧向流经检测装置时，如果液体样品中存在分析物，分析物在各组试剂点相继与结合试剂相结合直到分析物与上游试剂点结合而耗尽，分析物与试剂点结合在试剂点生成可检测的信号，并且试剂点处该信号的强度和/或总量为液体样品中的不同的分析物提供了定量或半定量分析。

39.实施例1中的检测装置，其中多个试剂点包括相同的可结合分析物的结合试剂或其它可结合分析物的结合试剂，多个试剂点组成了多条基本与液体样品层析方向平行的线，每条线上的试剂点包括等量的结合试剂，但在不同线上的试剂点包括不等量的结合试剂。

当液体样品侧向流经检测装置时，如果液体样品中存在分析物，分析物在各条线上的各试剂点按顺序与结合试剂相结合直到分析物通过上游试剂点并与之结合后耗尽，分析物与试剂点结合在试剂点生成可检测的信号，并且试剂点处该信号的强度和/或总量为液体样品中的分析物提供了定量或半定量分析。

40.实施例29中的检测装置，其中从装置的一端到另一端，垂直于液体样品层析方向上，不同线上的试剂点基本包括不等量的结合试剂。

41.实施例1的检测装置，其中多个试剂点包括两组结合试剂，，一个结合试剂组形成相对于所述液体样品流方向呈第一个角度的线条，另一个结合试剂组形成相对于液体样品流方向呈第二不同角度的线条，

其中所述多个试剂点包括两个不同的结合试剂组当所述液体样品沿着所述检测装置横向流动后，在一条线中的试剂点产生信号以指示在所述液体样本样品中分析物的存在和/或量，而在另一条线中的试剂点产生对照信号以指示该检测是正确进行的，并且

当所述液体样品包括所述分析物并且所述检测是正确进行的，那么所述两条试剂点线条产生阳性符号，指示在该液体样品中所述分析物的存在和/或量，当所述液体样品不包括所述分析物并且该检测是正确进行的，那么只有一条试剂点的线条产生阴性符号，指示在该液体样品中不存在所述分析物。

42.实施例41中的检测装置，其中一组试剂点形成基本与液体层析方向平行的试剂线，并且其他组别的试剂点形成基本与液体层析方向垂直的试剂线，并且在液体样品中存在分析物且检测合理进行的情况下，两条试剂线产生“+”号，表示液体样品中分析物的存在和/或总量，而在液体样品中不存在分析物且检测合理进行的情况下，仅一条试剂线产生“-”号，表示液体样品中不存在分析物。

43.实施例1中的检测装置，其中多个试剂点包括两组不同的结合试剂，在液体样品侧向流经检测装置后，一组试剂点产生字母数字信号，表示液体样品中分析物的存在和/或总量，而另一组试剂点产生对照符号的信号，表示检测是合理进行的。

44.实施例43中的检测装置，其中字母数字符号是单词。

45.实施例44中的检测装置，其中单词为yes,Pos,Positive,Neg,Negative,No或OK。

46.实施例43-45任何一个中的检测装置，其中对照符号信号是“+”号。

47.实施例43-46任何一个中的检测装置，是为竞争性检测而设计。

48实施例1其中多个试剂点包括结合到预期结合剂的试剂，在所述试剂点上形成的所述试剂与所述结合剂之间的结合模式指示所述试剂和所述结合剂之间的结合动力学性质。

49.实施例48中的检测装置，其中所述试剂是抗原，所述结合剂是结合到抗原的抗体，在所述试剂点上形成的所述抗原与所述抗体之间的结合模式指示所述抗原与所述抗体之间的结合动力学性质。

50.实施例49中的检测装置，其中所述动力学性质包括所述抗原与所述抗体之间结合的结合亲和力。

51.实施例50中的检测装置，其中试剂点前沿的结合方式表示抗体对于抗原具有高亲和力。

52.实施例1-51任何一个中的检测装置，包括至少一组可产生额外信号的试剂线，这种信号与液体样品中分析物的存在、缺失和/或总量无关，或者与检测是否正确进行无关。

53.实施例22中的检测装置，其中所述附加信号指示所述检测装置的可靠性、质量和/或识别，或者液体样品的识别。

54.实施例52-53中的检测装置，其中额外信号包括字母数字信号。

55.实施例1中的检测装置，包括至少一组在样品添加位置周围形成一圈的试剂点，且液体样品放射状地通过这组试剂点。

56.实施例1中的检测装置，进一步包括经过部分装置的层析。

57.实施例1-56任何一个中的检测装置，其中基质以条状或环形的形式存在。

58.实施例1-56任何一个中的检测装置，其中基质由单一元件或多种元元件组成。

59.实施例1-58任何一个中的检测装置，进一步在基质的液流交互区上游和内部还包括样品添加元件。

60.实施例1-59任何一个中的检测装置，在基质的液流交互区下游和内部还包括液体吸收元件。

61.实施例1-60任何一个中的检测装置，进一步包括用于指示液体样品正常层析和/或有效检测结果的对照位置。

62.实施例1-61任何一个中的检测装置，其中至少一部分基质由固体支撑物支撑。

63.实施例1-62任何一个中的检测装置，其中部分所述基质，在所述至少两个试剂点的上游，包括干燥的标签试剂，所述标签试剂能够被液体样品和/或进一步的液体迁移至所述的至少两个试剂点和/或对照位置产生可检测信号。

64.实施例63中的检测装置，。其中所述干燥的标签试剂位于所述检测装置上的样品添加位置的下游。

65.实施例63所述的检测装置，其特征在于，所述干燥的标签试剂位于所述检测装置的点样位置的上游。

66.实施例1-62任一所述的检测装置，其还包括位于所述至少两种试剂点上游的结合元件，该元件包括干燥的标签试剂所述标签试剂能够被液体样品和/或另一液体移动到所述至少两种所述试剂点，和/或被移动到一个对照位点，以产生可见的信号。

67.实施例66所述的检测装置，其特征在于，所述结合元件位于该检测装置的点样位置的下游。

68.实施例66所述的检测装置，其特征在于，所述结合元件位于该检测装置的点样位置的上游。

69.实施例63-68任一所述的检测装置，其特征在于，所述标签试剂与液体试样中的分析物相结合。

70.实施例63-68任一所述的检测装置，其特征在于，所述标签试剂与液体试样中的分析物竞争地与位于所述至少两种所述试剂点上的分析物的结合试剂结合。

71.实施例63-70任一所述的检测装置，其特征在于，所述的标签是可溶性标记物。

72.实施例63-70任一所述的检测装置，其特征在于，所述的标签是粒子标记物。

73.实施例63-72任一所述的检测装置，其特征在于，所述的标签试剂在以下材料存在下被干燥，该材料：a）使标签试剂稳定；b）促进标签试剂在液体中溶解或再悬浮；和/或c）促进标签试剂的流动性。

74.实施例73所述的检测装置，其特征在于，所述材料选自蛋白质，肽，多聚糖类，糖类，多聚物，动物胶以及清洁剂组成的组。

75.实施例1-74任一所述的检测装置，其特征在于，样品液体仅仅被用来输送分析物和/或标签试剂到所述至少两种所述试剂点。

76.实施例1-74任一所述的检测装置，其特征在于，显影液被用来输送分析物和/或标签试剂到所述至少两种所述试剂点。

77．实施例1-76任一所述的检测装置，其还包括一壳体，还包括至少盖住所述检测装置局部的壳体，其特征在于，其中所述壳体包括点样窗口以允许从或到所述至少两个试剂点的上游点样，以及在所述至少两个试剂点周围的可视的开口以允许在所述两个试剂点上的信号检测。

78．实施例77所述的检测装置，所述壳体覆盖整个检测装置。

79．实施例77所述的检测装置，其特征在于，其中至少基质的样品接收部位或样品添加元件的一部分不被所述壳体覆盖，并且所述样品是在壳体外部添加到所述基质的所述样品接收部位或者样品添加元件的一部分上，然后运输至所述至少两个试剂点。

80．实施例77-79任一所述的检测装置，其特征在于，壳体由塑料材料，可生物降解材料或纤维素材料构成。

81．实施例1-80任一所述的检测装置，其特征在于，所述液体样品沿着所述检测装置侧向移动，以产生位于所述至少两种所述试剂点的可检测信号。

82．一种用于检测液体样品中的分析物的方法，该方法包括：

a）使液体试样与实施例1-80任一所述的检测装置相接触，其中，所述的液体试样被滴加到所述检测装置的所述至少两种所述试剂点的上游的位点上;

b）在分析物和标签试剂存在于液体试样中的情况下，输送分析物和标签试剂到所述至少两种所述试剂点;

c）评估存在，不存在，量的多少和/或由所述至少两种所述试剂点处的标签试剂所产生的信号图案，从而确定液体试样中的被分析物的存在，不存在和/或量的多少。

83．实施例82所述的方法，其特征在于，所述液体样品和标签试剂被预先混合以形成混合物，所述混合物被滴加到所述检测装置。

84．实施例82所述的方法，其特征在于，所述检测装置包括使用前已干燥的标签试剂，所述已干燥的标签试剂被溶解或被再悬浮，并被液体样品输送到所述至少两种所述试剂点。

85．实施例84所述的方法，其特征在于，所述干燥的标签试剂被置于点样位置的下游，所述干燥的标签试剂被溶解或被再悬浮，并被液体样品输送到所述至少两种所述试剂点。

86．实施例84所述的方法，其特征在于，所述干燥的标签试剂被置于点样位置的上游，所述干燥的标签试剂被溶解或被再悬浮，并被另一种液体输送到所述至少两种所述试剂点。

87．实施例84所述的方法，其特征在于，所述标签试剂被被溶解或被再悬浮，并仅仅被液体样品输送到所述至少两种所述试剂点。

88．实施例84所述的方法，其特征在于，所述分析物和/或所述标签试剂被被溶解或被再悬浮，并被另外一种液体输送到所述至少两种所述试剂点。

89．实施例84-88任一所述的方法，其特征在于，所述液体样品为体液样品。

90.实施例89所述的方法，其特征在于，所述体液样品选自全血，血清，血浆和尿液样本组成的组。

91．实施例84-88任一所述的方法，其特征在于，其中所述液体样品是采自生物、证物、食品、生物战，或环境资源的样品。。

92.实施例82-91任一所述的方法，该方法被用于定量或半定量液体样品中的分析物的量。

93.实施例82-91任一所述的方法，该方法被用于检测液体样品中的多种分析物。

94．实施例93所述的方法，该方法被用于定量或半定量液体样品中的多种分析物的量。

95.实施例82-94任一所述的方法，其特征在于，所述分析物选自细胞、病毒和分子组成的组。

96．实施例82-94任一所述的方法，其特征在于，所述分析物选自以下构成的组：hCG,hLH,hFSH,hTSH，心脏病生物标记，传染性生物体抗原，抗传染性生物体抗体和疾病标记。

97．包括在基质上形成多个试剂点确保检测装置包括至少两个所述试剂点，所述至少两个试剂点不相互重叠并且彼此间有足够的间隔距离以便于当所述液体样品沿着所述基质横向流动时，流向、通过和/或围绕所述两个试剂点之一的液体样品流基本不影响流向、通过和/或围绕另一个所述试剂点的液体样品流，所述两个试剂点中的每一个既不是在所述液体样品流垂直方向上穿过所述基质整个宽度的试剂线，也不是完整的试剂线圈，并且液体样品沿所述检测装置横向流动并且经过所述的至少两个试剂点后，所述至少两个试剂点形成预定的图案，以指示在所述液体样品中的所述分析物的存在，不存在和／或量。

98.实施例97所述的方法，其特征在于，其中所述多个试剂点形成选自以下组成的组中的预设图案：线条、多个线条、符号、几何形状和字母数字形状。。

99.实施例98所述的方法，其特征在于，所述的字母数字图样为字母，单词，数字或它们的组合。

100.实施例98所述的方法，其特征在于，所述线条基本上平行于液体样品的层析方向。

101.实施例98所述的方法，其特征在于，所述线条基本上垂直于液体样品层析的方向。

102.实施例98所述的方法，其特征在于，所述的多条线条包括至少一条基本上平行于所述液体样品层析方向的线，和至少一条基本上垂直于所述液体样品层析方向的线。

103.实施例97-102任一所述的方法，其特征在于，所述多个试剂点通过在所述基质上的预订位置分配试剂形成。

104.实施例103所述的方法，其特征在于，中所述试剂是按要求的方法滴加或采用试剂机械转移的压印方法来分配的。

105.实施例104所述的方法，其特征在于，其中所述按要求的方法滴加采用喷墨或基于电磁阀的分配器、压电分配器、丝网印刷技术、喷气或喷枪技术、空心针印刷技术和近距离接触分配来实施。。

106.实施例97-105任一所述的方法，其中，至少一种所述试剂点具有大约0.1-1微米，1-10微米,10-50微米,51-100微米,101-200微米,201-300微米,301-400微米,401-500微米和501-1000微米的直径。

107.实施例97-105任一所述的方法，其中，至少一个所述试剂点具有的直接或表面积占所述基质的长度、宽度或表面积的约10%,5%,1%,0.5%,0.1%,0.05%,0.01%,0.001%或更小。。

108.实施例97-107任一所述的方法，其特征在于，所述至少两种所述试剂点之间的距离大约是1-10微米，10-50微米，51-100微米，101-200微米，201-300微米，301-400，401-500，或501-600微米。

109.实施例97-108任一所述的方法，包括形成多层所述多个试剂点。

110.实施例97-109任一所述的方法，该方法包括在基质的两面都形成至少一层多个试剂点。

111.实施例108-110任一所述的方法，该方法进一步包括形成多个试剂点的多层之间的干燥步骤

112.一种用于检测液体样品中分析物的检测装置，该装置由实施例97-111任一所述的方法制备而成。

普通技术人员可以理解，本发明可以包含任意数目的上述优选特征。

基于如下优选实施方式的详细描述，当考虑附图和权利要求书时，对于本领域的技术人员来说，本发明的进一步的特征和优点将是显而易见的。

提供的上述实例仅仅为了解释，并不是为了限制本发明的范围。上述的许多变化是合理的。由于对上述的实施例的修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的，可以预期，本发明仅仅被所附的权利要求书的范围所限制。

F．示例实施例1

执行本实验产生一个数据集，该数据集揭示了侧向层析检测信号形成的图像基元概念（的特性）。硝酸纤维素膜(CN95,赛多利斯)上使用Scienion抽气式-和分压式-阀门系统点上如图10-16所示的各种图案和斑点尺寸。浓度为0.25mg/ml(DCN)的生物素-BSA被用作所述硝酸纤维素膜上的捕获试剂。抗生蛋白链菌素-金结合物(40nm金,OD10,DCN)被使用作为信号试剂。抗生蛋白链菌素-金结合物以半带格式沿着硝酸纤维素膜侧向层析形成条带。预设的信号在如图10-16的A部分显示，实际检测中所得的信号见图10-16的B部分。

实施例2

本实验说明，可以通过去除背景并结合使用各种膜封闭液、使用稀释剂以及金结合物的浓度滴定来改善信号的清晰度。各种试纸条的组成和检测条件如下表1和表2所示。

表2.试纸条组成

表3.检测条件

如图17所示，随着金结合物的减少膜上的背景信号极大程度第变弱。用10ul的结合物完全地形成“X”膜，结果背景显色最弱(见试验K)。“+”设计要求至少25uL以产生深粉红色的膜。膜封闭并未使显色变弱（见试验N）。DCN结合垫封闭缓冲液并未消除背景（见检测S）。在本实验中，最佳设计看来是K和S。

实施例3

本实验显示使用荧光标记物的进行检测，，如铕（Europium）。使用铕乳胶-抗生素蛋白链霉素结合物（100nm微粒,由DCN产生的结合物）可以形成带有BSA-生物素捕获试剂的条带。在本实验中,100ul1×PBS，与25uL(1:10乳胶稀释剂)Eu乳胶在DCN结合垫封闭缓冲(10mM硼酸盐,3%BSA,1%PVP40,0.25%氚核X100,pH8.0)上相结合，并沿着硝酸纤维素膜侧向层析。在黑光下检测10分钟可拍摄并观察到结果。如图18所示，铕-乳胶结合物形成一个带有最小背景的清晰的可视信号。这表明具有荧光标记物和粒子的系统的效果优于具有金粒子的系统的。

实施例4侧向层析中使用“像素”概念优化信号显示

使用抽气式温敏器-和-分配器（dispense）微型螺线管-阀门(“BioJetPlus”)系统在硝酸纤维素膜(CN95,赛多利斯)上点上(5nL)如图19A–19E所示的各种图案。硝酸纤维素膜上的捕获试剂是浓度为1mg/ml的抗hCG抗体。抗hCG抗体/金结合物(40nm金,OD10,DCN)被用作为信号试剂。所述hCG分析物在1UI/mL浓度下可检测到，并且使用含0.1%Tween-201XPBS稀释样品。条带以使用液态金结合物的半带格式显示。

如图19A–19E所示，纵向排列的斑点阻止所述结合物沿条带均匀移动。检测线的外边缘颜色最暗，说明液体层析绕过预设的斑点发生了偏移，而不是穿过预设的斑点或者越过。斑点图案的变化，如检测线长度的增加以及锯齿图案，都没有提高结果。液滴间距的增大可以显著改善信号的显示。

实施例5.“像素”概念在复合侧向层析检测中的应用

使用抽气式温敏器-和-调配式微型螺线管-阀门(“BioJetPlus”)系统在硝酸纤维素膜(CN95,赛多利斯)上点满(5nL)如图20A–20D所示的各种图案。硝酸纤维素膜上的检测试剂是的抗hCG抗体（1mg/ml）和抗肌红蛋白抗体（0.5mg/ml）。浓度为0.5mg/ml的抗小鼠抗体捕获试剂被用作为系统的对照。抗hCG抗体/金结合物(40nm金,OD10,DCN)与抗肌红蛋白抗体/金结合物(40nm金,OD10,DCN)用作信号试剂。条带以使用液态金结合物半带格式

如图20A–20D所示，该检测方法可以精确地检测样品中目标分析物的不同浓度。抗鼠，抗肌球素和抗hCG的检测相互独立，没有观察到交叉反应。

实施例6.使用较小的分配量改善各种斑点图案的结构

使用压电温敏器调配系统使硝酸纤维素膜(CN95,赛多利斯)在硝酸纤维素膜上点布满(1nL)如图21A–21D所示的各种图案。硝酸纤维素膜上的检测试剂是浓度为1mg/ml的抗hCG抗体。浓度为0.5mg/ml的抗小鼠抗体捕获剂被用作为系统的对照。抗hCG抗体/金结合物(40nm金,OD10,DCN)被用作信号试剂。hCG分析物在1UI/mL浓度下被检测到，并且使用含0.1%的Tween-20的1XPBS稀释。条带以使用液态金结合物的半带格式显示。

如图20A–20D所示，无论线的位置如何，所述设置产生了均匀结合的清晰图案图21C和21D是使用hCG作为分析物所产生的信号。层析不间断，并且能够产生明显的阳性和阴性结果结果图（如图20C–21D所示，在检测过程中尽管没有使用阴性样本）。

上述出版物或者文件的引用，并不是承认前述的任何内容都属于相关的现有技术，也不构成对任何关于这些出版物或者文件的内容和日期的认可。

Claims (74)

1.检测液体样品中的分析物的检测装置，所述装置包括基质上的多个试剂点，其中所述多个试剂点包括至少两个相邻的形成与所述液体样品层析方向基本平行的线条的试剂点，并且所述至少两个相邻的试剂点不相互重叠并且彼此间有足够的间隔距离以便于当所述液体样品沿着所述基质横向流动时，流向、通过和/或围绕所述至少两个相邻的试剂点之一的液体样品流基本不影响流向、通过和/或围绕所述至少其它相邻试剂点的液体样品流，所述至少两个相邻的试剂点中的每一个既不是在所述液体样品流垂直方向上穿过所述基质整个宽度的试剂线，也不是完整的试剂线圈，并且当液体样品沿所述检测装置横向流动并且经过所述至少两个相邻的试剂点后，所述至少两个相邻的试剂点形成预定的图案，以指示在所述液体样品中的所述分析物的存在，不存在和/或量。

2.权利要求1所述的检测装置，其中所述多个试剂点包括至少10,50,100,500,1,000,5,000,10,000或更多试剂点。

3.权利要求1所述检测装置，其中至少四分之一，三分之一，一半或所有试剂点不相互重叠并且相互间有足够的间隔距离以便于当所述液体样品沿着所述基质横向流动时，流向、通过和/或围绕所述试剂点之一的液体样品流基本上不影响流向、通过和/或围绕其它试剂点的液体样品流。

4.权利要求1所述的检测装置，其中所述预定的图案选自以下构成的组：线条、多个线条、符号、几何形状和字母数字形状。

5.权利要求1所述的检测装置，其中进一步包括至少基本上垂直于所述液体样品流方向的线条。

6.权利要求1所述的检测装置，其中所述多个试剂点包括不同的试剂并且所述检测装置用于检测液体样品中的多种分析物。

7.权利要求1所述的检测装置，其中所述多个试剂点包括相同的试剂并且所述检测装置用于检测液体样品中的所述分析物的量。

8.根据权利要求1所述的检测装置，其中多个试剂点包括相同量的所述试剂。

9.根据权利要求1所述的检测装置，其中所述多个试剂点包括不同量的所述试剂。

10.权利要求1所述的检测装置，其中至少四分之一、三分之一、一半或全部试剂点具有0.1-1μm,1-10μm,10-50μm,51-100μm,101-200μm,201-300μm,301-400μm,401-500μm或501-1000μm的直径，或者至少四分之一、三分之一、一半或全部试剂点的直径或表面积占所述基质的长度、宽度或表面积的10％,5％,1％,0.5％,0.1％,0.05％,0.01％,0.001％或更小。

11.权利要求10的检测装置，其中至少四分之一、三分之一、一半或所有试剂点具有基本相同的尺寸或直径。

12.权利要求1所述检测装置，其中至少四分之一、三分之一、一半或全部试剂点具有选自以下构成的组中的形状：线条、圆形，棒状、正方形、三角形、矩形以及不规则形状。

13.权利要求12所述的检测装置，其中至少四分之一、三分之一、一半或全部试剂点具有相同的形状。

14.权利要求1所述检测装置，其中至少两个所述试剂点的边缘之间的距离是1-10μm,10-50μm,51-100μm,101-200μm,201-300μm,301-400,401-500,或501-600μm。

15.根据权利要求14所述的检测装置，其中至少四分之一、三分之一、一半或全部试剂点之间的距离基本相同。

16.根据权利要求1～15所述的任一检测装置，其中至少四分之一、三分之一、一半或全部试剂点包括能够特异性结合到分析物的试剂或特异性结合到另一种可结合分析物的结合试剂的试剂。

17.权利要求1所述检测装置，包括多层的多个试剂点。

18.权利要求1所述检测装置，在基质的两面都至少包括一层多个试剂点。

19.权利要求1所述检测装置，其中所述试剂是无机分子、有机分子或它们的复合体。

20.权利要求19所述的检测装置，其中所述有机分子是抗原或抗体。

21.权利要求1所述检测装置，其中所述基质具有多孔结构。

22.权利要求1所述检测装置，其中所述基质具有非多孔结构。

23.根据权利要求1所述的检测装置，其中所述多个试剂点包括相同的能够结合分析物或结合另一种能够结合分析物的结合试剂的试剂,所述多个试剂点形成与液体样品流方向基本平行的线条，当液体样品沿着所述检测装置横向流动时，所述分析物，如果存于所述液体样品中，会相继结合到每个试剂点的结合试剂上直到所述分析物因结合到上游试剂点而耗尽，所述分析物与所述试剂点的结合在所述试剂点处产生可确定的信号，所述试剂点上的所述可确定的信号的数量和/或强度提供所述液体样品中所述分析物的定量或半定量结果。

24.权利要求1所述的检测装置，其中所述多个试剂点包括能够结合不同分析物或结合另一种能够结合所述分析物的结合试剂的不同结合试剂，所述多个试剂点形成与液体样品流方向基本平行的线条，当液体样品沿着所述检测装置横向流动时，所述分析物，如果存于所述液体样品中，会结合到每个试剂点的结合试剂上，所述分析物与所述试剂点的结合在所述试剂点处产生可确定的信号，所述试剂点上的所述可确定的信号的存在和/或强度指示所述液体样品中所述分析物的存在和/或数量。

25.权利要求1所述的检测装置，其中多个试剂点包括不同结合试剂组，每个结合试剂组能够结合相同的分析物或结合另一种能够结合同种分析物的结合试剂，不同组中的所述结合试剂能够结合不同的分析物或结合其它能够结合不同分析物的结合试剂，

每组试剂点形成与液体样品流方向基本平行的线条，且由不同组试剂点形成的不同线条彼此间基本平行，

当所述液体样品沿着所述检测装置横向流动时，所述分析物，如果在所述液体样品中存在，则会相继结合到每组试剂点中的每个试剂点的结合试剂上，直到所述分析物因结合到上游试剂点而耗尽，所述分析物与所述试剂点的结合在所述试剂点处产生可确定的信号，且所述试剂点处的所述可确定的信号的强度和/或数量提供所述液体样品中所述不同分析物的定量或半定量结果。

26.权利要求1所述的检测装置，其中所述多个试剂点包括相同的能够结合分析物或另一种能够结合该分析物的结合试剂的结合试剂，所述多个试剂点形成基本平行于液体样品流方向的多条线条，每个线条中的试剂点包括相同数量的结合试剂，但是在不同线条中的试剂点包括不同数量的结合试剂，

当所述液体样品沿着所述检测装置横向流动时，所述分析物，如果存在于所述液体样品中，则将相继结合到每个线条中的每个试剂点的结合试剂上，直到所述分析物因结合到每个线条中的上游试剂点而耗尽，所述分析物与所述试剂点的结合在所述试剂点处产生可确定的信号，所述试剂点处的可确定的信号的强度和/或数量提供所述液体样品中所述分析物的定量或半定量结果。

27.权利要求1所述的检测装置，其中所述多个试剂点包括两个不同的结合试剂组，一个结合试剂组形成相对于所述液体样品流方向呈第一个角度的线条，另一个结合试剂组形成相对于液体样品流方向呈第二不同角度的线条，

当所述液体样品沿着所述检测装置横向流动后，在一条线中的试剂点产生信号以指示在所述液体样本样品中分析物的存在和/或量，而在另一条线中的试剂点产生对照信号以指示该检测是正确进行的，并且

当所述液体样品包括所述分析物并且所述检测是正确进行的，那么所述两条试剂点线条产生阳性符号，指示在该液体样品中所述分析物的存在和/或量，当所述液体样品不包括所述分析物并且该检测是正确进行的，那么只有一条试剂点的线条产生阴性符号，指示在该液体样品中不存在所述分析物。

28.权利要求27所述的检测装置，其中一组试剂点形成与液体样品流方向基本平行的线条，并且另外一组试剂点形成与液体样品流方向基本垂直的线条，并且

当所述液体样品包含所述分析物并且所述检测是正确进行的，那么两条试剂点的线条会产生“+”符号，指示该液体样品中所分析物的存在和/或量，当所述液体样品不包含所述分析物并且所述检测是正确进行的，则只有一条试剂点的线条产生“-”符号，指示在该液体样品中不存在所述分析物。

29.权利要求1所述的检测装置，其中所述多个试剂点包括两组不同的结合试剂，当所述液体样品沿所述检测装置横向流动后，在一个组中的试剂点产生字母数字信号，指示液体样品中所述分析物的存在和/或量，另一个组中的试剂点产生对照符号信号指示所述检测是正确进行的。

30.权利要求1所述检测装置，是为竞争性检测而设计。

31.权利要求1所述的检测装置，其中多个试剂点包括结合到预期结合剂的试剂，在所述试剂点上形成的所述试剂与所述结合剂之间的结合模式指示所述试剂和所述结合剂之间的结合动力学性质。

32.权利要求31所述的检测装置，其中所述试剂是抗原，所述结合剂是结合到抗原的抗体，在所述试剂点上形成的所述抗原与所述抗体之间的结合模式指示所述抗原与所述抗体之间的结合动力学性质。

33.权利要求1所述检测装置，其中包括至少一组试剂点，其产生与液体样品中的所述分析物的存在、不存在和/或量，或所述检测是否正确进行无关的附加信号。

34.权利要求33所述的检测装置，其中所述附加信号指示所述检测装置的可靠性、质量和/或识别，或者液体样品的识别。

35.权利要求1所述的检测装置，包括至少一组围绕所述样品添加位置形成环的试剂点，并且所述液体样品呈放射状移动通过该组试剂点。

36.权利要求1所述的检测装置，还包括通过装置局部的液流。

37.权利要求1所述检测装置，其中所述基质是单个元件或包括多个元件。

38.权利要求1所述检测装置，在基质的液流交互区上游和内部还包括样品添加元件。

39.权利要求1所述检测装置，在基质的液流交互区下游和内部还包括液体吸收元件。

40.权利要求1所述检测装置，还包括用于指示液体样品的正常层析和/或有效检测结果的方法的对照位置。

41.权利要求1所述检测装置，其中至少部分所述基质由固体支持物支撑。

42.权利要求1所述检测装置，其中部分所述基质，在所述至少2个相邻的试剂点的上游，包括干燥的标签试剂，所述标签试剂能够被液体样品和/或进一步的液体迁移至所述的至少两个相邻的试剂点和/或对照位置产生可检测信号。

43.权利要求1所述的检测装置，在所述至少两个试剂点的上游，还包括包含干燥的标签试剂的结合元件，所述标签试剂能够被液体样品和/或进一步的液体迁移至所述的至少两个试剂点和/或对照位置产生可检测信号。

44.权利要求42所述的检测装置其中所述标签试剂结合所述液体样品中的分析物。

45.权利要求42所述的检测装置，其中所述标签试剂与所述液体样品中的分析物竞争结合所述至少两个试剂点上的所述分析物的结合试剂。

46.权利要求42所述检测装置，其中所述标签是可溶性标签或颗粒标签。

47.权利要求42所述检测装置，其中所述标签试剂是在那种材料存在的情况下干燥的，该材料：a)使标签试剂稳定；b)有利于标签试剂溶解或再悬于液体中，和/或c)有利于标签试剂移动。

48.权利要求1所述检测装置，其中样品液体单独和/或显色液用于运送所述分析物和/或标签试剂到所述至少两个试剂点。

49.权利要求1所述检测装置，还包括至少盖住所述检测装置局部的壳体，其中所述壳体包括点样窗口以允许从或到所述至少两个试剂点的上游点样，以及在所述至少两个试剂点周围的可视的开口以允许在所述两个试剂点上的信号检测。

50.权利要求49所述的检测装置，其中所述壳体包括塑料材料、生物可降解材料或纤维质材料。

51.权利要求1所述检测装置，其中所述液体样品已经沿着所述检测装置横向移动在所述至少两个试剂点产生可检测信号。

52.检测液体样品中分析物的方法，所述方法包括：

a)使液体样品与权利要求1～50所述的任一检测装置接触，其中所述液体样品被施加在所述检测装置的所述至少两个相邻的试剂点的上游位置；

b)如果存在于所述液体样品中，分析物和标签试剂运输至所述至少两个相邻的试剂点；并且

c)评估由所述至少两个相邻试剂点上的标签试剂产生的信号的存在、不存在、量和/或图案以确定在所述液体样品中所述分析物的存在、不存在和/或量。

53.权利要求52所述的方法，其中所述液体样品和所述标签试剂被预混形成混合物并且所述混合物被应用于所述检测装置。

54.权利要求52所述的方法，其中所述检测装置包括使用前干燥的标签试剂，所述干燥标签试剂被溶解或重新悬浮，并被所述液体样品运输至所述至少两个试剂点。

55.权利要求52所述方法，其中所述液体样品是体液样品。

56.权利要求55所述的方法，其中所述体液样品选自以下构成的组：全血、血清、血浆、尿液和唾液样品。

57.权利要求52所述方法，其中所述液体样品是采自生物、证物、食品、生物战，或环境资源的样品。

58.权利要求52所述方法，所述方法用于定量或半定量液体样品中分析物的量。

59.权利要求52所述方法，所述方法用于检测液体样品中多种分析物。

60.权利要求52所述方法，其中所述分析物选自以下组成的组：细胞、病毒和分子。

61.权利要求52所述方法，其中所述分析物选自以下构成的组：人绒毛膜促性腺激素、人黄体生成激素、人卵泡刺激素、人促甲状腺激素、心脏生物标记，传染性生物体的抗原，抗传染性生物体的抗体和疾病标记。

62.制备用于检测液体样品中分析物的检测装置的工艺，包括在基质上形成多个试剂点确保检测装置包括至少两个相邻的形成与所述液体样品层析方向基本平行的线条的试剂点，并且所述至少两个试剂点不相互重叠并且彼此间有足够的间隔距离以便于当所述液体样品沿着所述基质横向流动时，流向、通过和/或围绕所述至少两个相邻的试剂点之一的液体样品流基本不影响流向、通过和/或围绕所述至少其它相邻试剂点的液体样品流，所述至少两个相邻的试剂点中的每一个既不是在所述液体样品流垂直方向上穿过所述基质整个宽度的试剂线，也不是完整的试剂线圈，并且液体样品沿所述检测装置横向流动并且经过所述的至少两个相邻的试剂点后，所述至少2个相邻的试剂点形成预定的图案，以指示在所述液体样品中的所述分析物的存在，不存在和/或量。

63.权利要求62所述的工艺，其中所述多个试剂点形成选自以下组成的组中的预设图案：线条、多个线条、符号、几何形状和字母数字形状。

64.权利要求62所述的工艺，其中所述检测装置形成包括至少一个基本上平行于所述液体样品流方向的线条和至少一个基本上垂直于所述液体样品流的多个线条。

65.权利要求62所述工艺，所述多个试剂点通过在所述基质上的预订位置分配试剂形成。

66.权利要求65所述的工艺，其中所述试剂是按要求的方法滴加或采用试剂机械转移的压印方法来分配的。

67.权利要求62所述工艺，其中至少一个所述试剂点具有0.1-1μm,1-10μm,10-50μm,51-100μm,101-200μm,201-300μm,301-400μm,401-500μm和501-1000μm的直径，或其中至少一个所述试剂点具有的直接或表面积占所述基质的长度、宽度或表面积的10％,5％,1％,0.5％,0.1％,0.05％,0.01％,0.001％或更小。

68.权利要求62所述工艺，其中至少两个所述试剂点之间的距离1-10μm,10-50μm,51-100μm,101-200μm,201-300μm,301-400,401-500,或501-600μm。

69.权利要求62所述工艺，所述工艺包括形成多层所述多个试剂点。

70.权利要求62所述工艺，所述工艺包括在所述基质的两面都形成至少一层所述多个试剂点。

71.权利要求69所述工艺，还包括在形成多层所述多个试剂点之间的干燥步骤。

72.检测液体样品中分析物的检测装置，由权利要求62～71所述的任一工艺制造。

73.权利要求57所述的方法，其中所述生物液体样品采自生物战资源。

74.权利要求1所术的检测装置，其包括至少五个形成与所述液体样品层析方向基本平行的线条的试剂点，并且在所述至少五个试剂点中的任意两个相邻的试剂点不重叠并且彼此间充分间隔以便于当所述液体样品沿着所述基质横向流动时，流向、通过和/或围绕所述至少两个相邻的试剂点之一的液体样品流基本不影响流向、通过和/或围绕所述其它相邻试剂点的液体样品流。